口蹄疫疫苗Th佐劑的前期研究.pdf

1、口蹄疫(foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV)所引起的一類急性傳染病，該病主要是引起感染的動物的口、舌、唇、蹄等部位發(fā)生水泡，最終破爛形成爛斑，給畜牧業(yè)經(jīng)濟帶來巨大的損失?？谔阋卟《緦儆谛NA病毒科，口蹄疫病毒屬，基因組為單股正鏈RNA，全長約7800bp，能夠編碼四種結(jié)構(gòu)蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4)和七種非結(jié)構(gòu)蛋白(2A、2

2、B、2C、3A、3B、3C、3D)。
　　 其中3D蛋白是口蹄疫病毒編碼的一種RNA聚合酶，在口蹄疫病毒RNA的復(fù)制方面有重要作用。研究者在口蹄疫病毒3D蛋白上發(fā)現(xiàn)了多個Th細(xì)胞表位，并且能夠有效的輔助B淋巴細(xì)胞活化產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，為新型口蹄疫疫苗和佐劑研究奠定了基礎(chǔ)，對于口蹄疫的防治具有重要意義。
　　 本實驗為了獲得含有多個Th細(xì)胞表位的重組蛋白，根據(jù)Mar(l)'aM等的研究，設(shè)計了兩個基于3D蛋白序列的組合型T

3、h表位肽;設(shè)計優(yōu)化并人工合成相應(yīng)的核酸序列;并用原核表達的方法，構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET28a-Th115和pAIYM-Th157;并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21，分別經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，進行SDS-PAGE電泳分析，結(jié)果顯示，成功獲得了Th115(16KD)和Th157(19KD)重組蛋白，且經(jīng)Western-blot鑒定，兩種重組蛋白都能與His單抗發(fā)生特異性反應(yīng)，為預(yù)期的目的蛋白。對表達產(chǎn)物進行可溶性分析發(fā)現(xiàn)，目的蛋白部分部以包涵體形式存在

4、，部分存在于上清內(nèi)，將兩種目的蛋白的可溶性上清液經(jīng)鎳柱純化后獲得了較高濃度和較高純度的Th115和Th157重組蛋白。
　　 將3D Th115蛋白和Th157蛋白作為Th佐劑分別與主抗原按1/2.5的比例配制疫苗免疫豬群并和只添加主抗原的疫苗作對照，并且以PBS免疫作為陰性對照。用ELISA方法測定免疫后豬的抗體水平，結(jié)果顯示，PBS免疫的豬血清無抗體產(chǎn)生;只含主抗原的疫苗免疫的豬群抗體效價為1∶12800; Th157蛋白添