人參莖葉皂甙對口蹄疫疫苗的免疫佐劑作用研究.pdf

1、人參是多年生草本植物,屬于五加科人參屬(Araliaceae)。從人參根中提取的人參皂甙(ginsenosides,GS)是人參的主要活性成分之一,具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)作用,能增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞活性、提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力和增強(qiáng)動物機(jī)體對胸腺依賴性抗原的初次抗體應(yīng)答能力等。但GS價(jià)格相對較高,使其在畜牧生產(chǎn)上的推廣應(yīng)用受到很大的限制。研究發(fā)現(xiàn),人參的莖、葉和種子中也含GS。其中,人參莖葉皂甙(saponin extracted from g

2、inseng stems and leaves,GSL)是從人參的莖葉中提取的皂甙成分,其價(jià)格相對低廉,且與人參根皂甙具有相似的藥理作用,所以對GSL的開發(fā)利用具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本研究以滅活A(yù)sia-Ⅰ型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)為抗原,通過GSL單獨(dú)或與油佐劑配伍來評價(jià)對FMDV抗原的免疫佐劑作用,為進(jìn)一步利用GSL提高FMD疫苗的免疫效果提供依據(jù)。研究內(nèi)容包括主要以下三部分:<

3、br>　　 1.人參莖葉皂甙對Asia-Ⅰ型口蹄疫抗原的免疫佐劑作用
　　 將雌性ICR小鼠隨機(jī)分組,分別皮下注射生理鹽水、滅活A(yù)sia-Ⅰ型FMDV抗原、不同劑量的GSL(1μg、5μg、10μg、20μg、50μg、100μg、500μg)+FMDV抗原,白油+FMDV抗原,三周后加強(qiáng)免疫一次。于二免后第二周采集血樣,用間接酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測

4、血清中抗FMDV IgG總抗體水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與抗原對照組相比,不同劑量的GSL+FMDV抗原都能夠提高小鼠血清中抗FMDV抗體水平,其中10μg劑量的GSL+FMDV抗原能顯著提高小鼠血清中抗FMDV抗體水平(P＜0.05),說明10μg劑量的GSL對Asia-Ⅰ型FMDV抗原的免疫佐劑作用最強(qiáng)。另外,免疫后的小鼠在食欲、精神狀態(tài)和行為方面均表現(xiàn)正常,無明顯異常變化,說明GSL作為免疫佐劑皮下注射是比較安全的。2.含人參莖葉皂甙的

5、Asia-Ⅰ型口蹄疫抗原的油佐劑疫苗的制備方法研究
　　 采用兩種方法制備含GSL的FMD油佐劑疫苗,方法一是將抗原(含吐溫-80)和油佐劑(含硬脂酸鋁,司班.80和白油)按1∶1的比例進(jìn)行乳化制成FMD油佐劑疫苗,然后與不同濃度的GSL(GSL的終濃度分別為:0.5 mg/ml、1 mg/ml、5mg/ml)溶液進(jìn)行乳化,制成含GSL的FMD油佐劑疫苗;方法二是在FMDV抗原溶液中加入不同濃度的GSL(GSL的終濃度分別為:0

6、.5 mg/ml、1 mg,/ml、5 mg/ml)溶液后再與等量的油佐劑進(jìn)行乳化制成含GSL的FMD油佐劑疫苗,并對兩種方法制備成的含GSL的FMD油佐劑疫苗分別進(jìn)行了穩(wěn)定性觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在方法一中,終濃度是0.5 mg/ml和1 mg/ml的GSL能與先前制備的FMD油佐劑疫苗成功乳化,獲取物理性狀比較穩(wěn)定的含GSL的FMD油佐劑疫苗;而在方法二中,只有終濃度為0.5 mg/ml的GSL與FMDV抗原溶液混合后能與油佐劑成功乳化,

7、獲取物理性狀比較穩(wěn)定的含GSL的FMD油佐劑疫苗。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明,在含GSL的Asia-Ⅰ型FMDV抗原的油佐劑疫苗制各中,方法一更利于含GSL的Asia-Ⅰ型FMDV抗原油佐劑疫苗的制備。3.含人參莖葉皂甙的Asia-Ⅰ型抗原油佐劑疫苗的免疫效果
　　 將雌性ICR小鼠隨機(jī)分為5組,分別皮下注射生理鹽水,FMDV,GSL(10μg)+FMDV,白油+FMDV,GSL(10μg)+白油+FMDV,三周后加強(qiáng)免疫一次。于二免后第二周

8、采集血樣,分離血清,用間接ELISA法檢測血清中抗體水平,并檢測了免疫小鼠的脾淋巴細(xì)胞在刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)刺激下體外細(xì)胞增殖反應(yīng)情況和ConA刺激后的脾淋巴細(xì)胞上清液中的細(xì)胞因子產(chǎn)生情況。結(jié)果表明,與白油組相比,GSL+白油組能提高小鼠血清中生IgG總抗體和抗體亞類水平,其中能顯著提高小鼠血清中IgG2a和IgG2b水平(P＜0.05);與白油組相比,GSL+白油組提高了免疫小鼠的脾淋巴細(xì)胞在ConA刺激下體外增殖反