斑馬魚肝臟微細結構及膽管系統(tǒng)的研究.pdf

1、斑馬魚（Brachydaniorerio）具有個體小、易養(yǎng)殖、繁殖能力強、生殖周期短、遺傳背景清晰、體外受精且胚胎發(fā)育透明等特點。廣泛應用于遺傳發(fā)育、藥物篩選、毒性試驗以及分子生物學等領域的研究。斑馬魚已經(jīng)成為繼小鼠、果蠅和線蟲之后的又一模式動物。肝臟是魚體最大的腺體，在物質代謝、解毒、凝血和防御等生命活動過程中起著至關重要的作用。迄今為止，一些學者主要從基因水平探究斑馬魚肝臟的發(fā)育情況以及一些人類疾病動物模型，從形態(tài)學角度來研究斑馬魚

2、肝臟的報道較少。本研究的目的在于從形態(tài)學角度來闡述和解讀斑馬魚肝臟的組織構造，為進一步研究斑馬魚肝臟的發(fā)育與功能代謝提供形態(tài)學依據(jù)，并為斑馬魚肝臟三維構建和結構量化奠定基礎。
　　 試驗Ⅰ斑馬魚肝臟的顯微和超微結構應用光鏡和透射電鏡技術對斑馬魚肝臟的組織形態(tài)和超微結構進行了觀察。結果表明，斑馬魚肝臟沒有典型的門管區(qū)，靜脈和膽管隨機地分布在肝實質中，很難觀察到動脈。肝板由兩層并列的肝細胞排列成雙層板狀結構，以中央靜脈為中心呈散射狀

3、分布，肝板（肝細胞索）呈彎曲、分支和吻合狀態(tài)，其間是血竇。肝細胞核大而圓，核仁分區(qū)明顯，核孔數(shù)目多，且密度大，呈現(xiàn)細胞代謝活躍旺盛的形態(tài)。胞質中粗面內(nèi)質網(wǎng)（RER）既有管狀結構也有扁平囊狀結構，扁平囊狀結構的RER呈區(qū)域化的層層排列，可達20多層。線粒體成群分布，并且與RER緊密接觸，為RER合成蛋白質提供能量。本實驗通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)當細胞質富含線粒體、RER、核糖體時，核孔的數(shù)目多，細胞質內(nèi)出現(xiàn)一定量的溶酶體，糖原在細胞質內(nèi)有少量的聚

4、集。當細胞質內(nèi)有大量的糖原分布時，則核孔的數(shù)目較少，且細胞器也較少。表明，當細胞的合成活性旺盛時，細胞內(nèi)的大部分糖原被消耗利用，以保證肝細胞內(nèi)核酸和蛋白質正常代謝，而線粒體也在細胞內(nèi)蛋白質合成的過程中提供能量。本文也對內(nèi)皮細胞、貯脂細胞、紅細胞和淋巴細胞進行了描述。并對斑馬魚肝臟的結構與其他硬骨魚類進行了比較。
　　 試驗Ⅱ斑馬魚肝臟膽管系統(tǒng)的研究應用光鏡、透射電鏡技術以及免疫組織化學方法，系統(tǒng)觀察斑馬魚肝臟膽管系統(tǒng)組織結構和超

5、微結構。結果表明，斑馬魚肝臟膽管系統(tǒng)在肝實質內(nèi)呈樹枝狀分布。膽管系統(tǒng)由細胞內(nèi)和細胞間膽道、前膽小管，膽小管和膽管構成。細胞內(nèi)膽道起源于細胞核附近，并且存在向細胞表面遷移的現(xiàn)象。前膽小管由前膽小管上皮細胞（BP細胞）和肝細胞共同構成管道的管壁。BP細胞位于肝細胞之間，胞質少，細胞核呈狹長形，通過透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，BP細胞與肝細胞通過緊密連接進行細胞間的通訊活動。膽小管管壁通常由2～4個上皮細胞構成，膽小管上皮細胞與肝細胞之間直接接觸，并沒

6、有基底膜使之相隔。本實驗通過透射電鏡還觀察到了由一個上皮細胞質膜突起再內(nèi)折形成的膽小管，并通過一個縱向的連接復合體密封管道。膽管的管壁上皮細胞由立方上皮細胞或柱狀上皮細胞構成，膽管外有結締組織環(huán)繞。此外，淋巴細胞也參與了膽管管壁上皮細胞的構成，表明膽管存在粘膜免疫的應答。前膽小管和膽小管是連接細胞內(nèi)膽道和膽管的部分，因此，本實驗認為前膽小管和膽小管相當于哺乳動物的赫林管。Mg2+-ATP酶反應顯示，膽管系統(tǒng)被染成棕黑色，交織成網(wǎng)。通過免