魷魚肝臟中魚油和降血壓活性肽的制備及研究.pdf

1、本研究以魷魚肝臟為原料，提取魚油和蛋白質(zhì)，用酶解的方法水解蛋白質(zhì)制各血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制肽，并對(duì)其酶解條件進(jìn)行優(yōu)化以及對(duì)ACE抑制肽進(jìn)行初步分離。為魷魚肝臟在食品、藥品和飼料方面的應(yīng)用提供了理論依據(jù)，以實(shí)現(xiàn)魷魚肝臟中蛋白質(zhì)和油脂得以綜合利用，減少廢棄物的排放。 一、測(cè)定了魷魚肝臟的組成成分，采用凱氏定氮法測(cè)得蛋白質(zhì)含量為14.51％(W/W)，索氏提取法測(cè)得油脂含量為32.24％(W/W)。 二、分離肝臟中的蛋

2、白質(zhì)和油脂，采用高壓蒸煮法提取魚油，將剩余粗蛋白用丙酮處理三次除脂，蛋白質(zhì)的得率約為濕重的20％。 三、油脂的精煉，利用磷酸脫膠、氫氧化鈉脫酸、活性白土脫色、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)真空處理脫腥，得到精煉魷魚油。其色澤淺黃、澄清，具有淡魚腥味，理化指標(biāo)達(dá)到SC/T3502-2000精制魚油的一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。通過氣相色譜/質(zhì)譜分析檢測(cè)魷魚油的脂肪酸組成，其中多不飽和脂肪酸含量較高，主要物質(zhì)是EPA和DHA，含量分別為13.1％和20.3％。 四

3、、蛋白酶水解魷魚肝臟蛋白，應(yīng)用七種不同的蛋白酶進(jìn)行酶解，最終選擇胃蛋白酶為水解用酶。以ACE抑制活性和水解度為指標(biāo)，對(duì)胃蛋白酶水解魷魚肝臟蛋白的條件進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳條件為：底物濃度2.5％，酶與底物的質(zhì)量比2％，在37℃條件下酶解20h。 五、活性肽的分離，將魷魚肝臟蛋白的酶解液經(jīng)過截留分子量為10000Da的濾膜超濾處理后，用Sephadex G-25初步分離，洗脫得到5個(gè)洗脫峰，其中粗分物組分Ⅱ的ACE抑制活性較高，其半抑

4、制濃度(IC<,60>)為1.63mg/mL。其中組分Ⅱ的ACE抑制活性在溫度4～100℃、pH值2～12之間基本沒有變化。而且依次用胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶酶解組分Ⅱ，其對(duì)ACE抑制活性的變化不大。用Lineweaver-Burk法分析組分Ⅱ?qū)CE的抑制模式為競(jìng)爭(zhēng)性抑制。 六、將粗分物組分Ⅱ用DEAE陰離子交換柱和Sephadex LH-20繼續(xù)分離純化，最終得到兩個(gè)組分，用反相高效液相色譜 C18 柱檢測(cè)其純度。結(jié)