硒、β-胡蘿卜素對大鼠生理功能影響及防治肝癌的研究.pdf

1、目的：
　　在建立Wistar大鼠移植性肝細胞癌模型前（預(yù)防性）、后（治療性）單獨/聯(lián)合給予硒、β-胡蘿卜素。觀察二者對大鼠生理功能作用及影響肝癌發(fā)生、發(fā)展的影響作用，以期為防治肝癌提供新思路。
　　方法：
　　1、預(yù)防性階段：在建立Wistar大鼠移植性肝細胞癌模型前，單獨/聯(lián)合每日定時根據(jù)體重給予硒、β-胡蘿卜素4周：硒實驗組（亞硒酸鈉0.3mg/(kg·d)），β-胡蘿卜素實驗組（β-胡蘿卜素10mg/(kg·d

2、)），硒聯(lián)合β-胡蘿卜素實驗組（亞硒酸鈉0.3mg/(kg·d)+β-胡蘿素10mg/(kg·d)），對照組（水0.3mg/(kg·d)+油10mg/(kg·d)）。期間觀察大鼠一般體征，每日記錄攝食量，每48h稱量記錄體重，計算食物利用率。實驗第30天，各組處死10只大鼠，采血，檢測血生化、血清及肝組織抗氧化指標（T-SOD、GSH-Px、MDA）；計算臟器系數(shù)；制備大鼠肝臟HE染色病理切片，觀察肝臟病理結(jié)構(gòu)變化。
　　2、剩余

3、56只大鼠（14×4組）開腹建立Wistar大鼠Walker-256移植性肝細胞癌模型，觀察大鼠行為體征一周。
　　3、建模后第八天，各實驗組繼續(xù)給予相應(yīng)受試物。干預(yù)至有大鼠出現(xiàn)死亡時，處死全部大鼠，采血，檢測血常規(guī)、血生化、血清及肝組織抗氧化指標（T-SOD、GSH-Px、MDA）；計算臟器系數(shù)；制備大鼠肝臟HE染色病理切片，觀察肝臟病理結(jié)構(gòu)變化。并使用Western Blot檢測肝臟組織Bcl-2、Bax蛋白表達情況。

4、　　結(jié)果：
　　1、預(yù)防性階段
　　1.1、大鼠一般體征
　　在預(yù)防性階段，各組大鼠毛發(fā)正常，眼耳口鼻無異常分泌物，精神佳，行為活動正常。
　　1.2、體重、攝食量及食物利用率情況
　　預(yù)防性階段，各組大鼠體重均保持逐漸趨緩的增長。雌鼠第二周體重增長量Se組小于聯(lián)合組和對照組(P<0.01)。各組大鼠同實驗節(jié)點攝食量和食物利用率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　1.3、臟器系數(shù)
　　雄鼠：肝臟臟器系數(shù)Se

5、組大于β-C組(P<0.05)，脾臟臟器系數(shù)Se組大于β-C組和聯(lián)合組(P<0.01)；雌鼠：肺臟臟器系數(shù)聯(lián)合組大于對照組(P<0.05)，卵巢臟器系數(shù)Se組大于聯(lián)合組(P<0.05)。
　　1.4、血生化相關(guān)指標
　　直接膽紅素與間接膽紅素的比值：β-C組小于對照組(P<0.05)，β-C組小于Se組和聯(lián)合組(P<0.01)；球蛋白的值：β-C組和聯(lián)合組均大于對照組(P<0.05)；BUN的值：聯(lián)合組小于β-C組(P<0.

6、05)；各組大鼠血糖血脂代謝指標差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　1.5、血清及肝組織抗氧化指標
　　1.5.1、血清抗氧化指標
　　各組大鼠血清抗氧化指標差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　1.5.2、肝組織抗氧化指標
　　組織T-SOD活力：Se組和聯(lián)合組小于對照組(P<0.01)，β-C組大于對照組(P<0.05)，Se組小于聯(lián)合組和β-C組，β-C組大于聯(lián)合組(P<0.01)；組織GSH-Px活力：Se組和聯(lián)合組小于對照

7、組(P<0.01)，β-C組大于對照組(P<0.01)，Se組和聯(lián)合組小于β-C組(P<0.01)；組織MDA含量：各組數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　1.6、病理學(xué)變化
　　預(yù)防性階段各組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常。
　　2、移植性肝細胞癌模型建立
　　接種大鼠均出現(xiàn)不同程度的精神萎靡、毛發(fā)蓬亂暗淡、進食量及體重減少等情況。每組抽取2只大鼠處死后解剖，均于肝臟附近發(fā)現(xiàn)肉眼可見瘤結(jié)節(jié)，移植性肝細胞癌大鼠模型建立成功。

8、　　3、治療性干預(yù)階段
　　3.1、大鼠一般體征
　　大鼠基本情況同上，個別大鼠出現(xiàn)口鼻血樣分泌物、腹部膨脹腫大、行動不便等情況。
　　3.2、體重、攝食量及食物利用率
　　體重：雄鼠體重：第一周，β-C組和聯(lián)合組大于對照組(P<0.01)；第三周，Se組和β-C組大于對照組(P<0.05)；第四周，Se組大于對照組和聯(lián)合組(P<0.05)；接種前后，β-C組體重減少量大于Se組、聯(lián)合組和對照組。雌鼠體重：接種前

9、后Se組體重減少量大于對照組(P<0.05)。
　　進食量：接種雌鼠接種前Se組攝食量大于對照組和聯(lián)合組(P<0.05)。
　　食物利用率：接種大鼠食物利用率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.3、臟器系數(shù)
　　雄鼠臟器系數(shù)：脾臟臟器系數(shù)β-C組小于聯(lián)合組(P<0.05)。雌鼠臟器系數(shù)：肺臟臟器系數(shù)，聯(lián)合組大于Se組、β-C組和對照組(P<0.01)，Se組小于對照組(P<0.05)；肝臟臟器系數(shù)，Se組和β-C組小于對

10、照組(P<0.05)，Se組和β-C組小于聯(lián)合組(P<0.05)；脾臟臟器系數(shù)，Se組小于β-C組(P<0.05)；右腎臟器系數(shù)，Se組和聯(lián)合組小于對照組(P<0.05)。
　　3.4、血常規(guī)和血生化
　　3.4.1、血常規(guī)相關(guān)指標
　　大型血小板比率：聯(lián)合組大于對照組(P<0.05)，Se組小于聯(lián)合組(P<0.05)；白細胞相關(guān)指標：各組數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.4.2、血生化相關(guān)指標
　　TP的值

11、：Se組小于對照組(P<0.01)，Se組小于β-C組和聯(lián)合組(P<0.05)；GLO的值：Se組小于對照組(P<0.01)，Se組小于β-C組和聯(lián)合組(P<0.05)；BUN的值：Se組大于β-C組(P<0.05)；各組血糖血脂代謝指標差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.5、血清及肝組織抗氧化指標
　　3.5.1、血清抗氧化指標
　　各組大鼠血清抗氧化指標（T-SOD、GSH-Px、MDA）差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.

12、5.2、肝組織抗氧化指標
　　組織T-SOD活力：Se組大于對照組(P<0.01)，聯(lián)合組大于對照組(P<0.05)，β-C組大于Se組(P<0.01)、對照組(P<0.01)和聯(lián)合組(P<0.05)；組織GSH-Px活力：Se組、β-C組、聯(lián)合組均大于對照組(P<0.01)，聯(lián)合組大于Se組和β-C組(P<0.01)；組織MDA含量：Se組大于對照組、β-C組和聯(lián)合組(P<0.01)，β-C組大于對照組(P<0.01)和聯(lián)合組(

13、P<0.05)。
　　3.6、病理學(xué)變化
　　接種后大鼠肝臟出現(xiàn)病理性結(jié)構(gòu)損傷。
　　3.7、肝組織蛋白表達情況
　　Bcl-2蛋白表達：Se組大于對照組(P<0.05)和聯(lián)合組(P<0.01)，聯(lián)合組小于對照組(P<0.05)和β-C組(P<0.01)。Bax蛋白表達：β-C組和聯(lián)合組大于Se組(P<0.05)。
　　Bcl-2/Bax比值：聯(lián)合組小于對照組、Se組和β-C組(P<0.01)，β-C組和聯(lián)

14、合組小于對照組(P<0.01)，Se組大于對照組、聯(lián)合組和β-C組(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.預(yù)防性階段，各組大鼠生長發(fā)育良好，硒、β-胡蘿卜素攝入對大鼠正常生長發(fā)育不會造成不良影響，亦不對大鼠造成有害刺激或氧化損傷，且β-胡蘿卜素實驗組可以提高大鼠肝臟的抗氧化水平。
　　2.本實驗通過開腹建立Wistar大鼠Walker-256移植性肝細胞癌模型是可行的。建立移植性肝細胞癌模型后，大鼠受到腫瘤細胞的侵襲作

15、用，機體出現(xiàn)一系列病癥反應(yīng)，相應(yīng)的諸多機體功能亦出現(xiàn)紊亂變化。
　　3.預(yù)防和治療性給予大鼠適量的硒、β-胡蘿卜素可提高機體的抗氧化能力，二者聯(lián)合可以降低肝臟組織Bcl-2蛋白的表達，提高Bax蛋白的表達，促進腫瘤細胞的凋亡，有利于防治肝癌的發(fā)生、發(fā)展。提示硒、β-胡蘿卜素聯(lián)合應(yīng)用在肝細胞癌的防治方面有積極的作用，作為一種新思路，有進一步繼續(xù)研究的價值及意義。
　　4.硒影響機體生理功能及防治肝癌方面表現(xiàn)出雙向的生物調(diào)節(jié)作用