轉(zhuǎn)snc1基因棉花抗枯萎病棉株檢測(cè)與選育.pdf

1、隨著新疆棉花種植面積的逐年增加，輪作倒茬困難，品種更換加快和盲目引種等，造成棉花枯萎病日益加重，選育抗病品種已成為棉花育種的首要任務(wù)。為提高棉花的抗病性，我們借助于基因工程技術(shù)，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將從擬南芥中分離克隆的抗病基因snc1轉(zhuǎn)入中棉所35和軍棉1號(hào)中，運(yùn)用多種方法在整合水平和表達(dá)水平上對(duì)外源基因進(jìn)行檢測(cè)，并且進(jìn)行抗病性鑒定，同時(shí)從病程相關(guān)蛋白表達(dá)、防御酶系分析和組織結(jié)構(gòu)抗性分析等角度進(jìn)行了功能研究。結(jié)果如下： (1)

2、采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，改良部分遺傳轉(zhuǎn)化條件，選擇適當(dāng)時(shí)期的外植體，適當(dāng)?shù)慕輹r(shí)間，適當(dāng)?shù)念A(yù)培養(yǎng)時(shí)間等，使得遺傳轉(zhuǎn)化前期從轉(zhuǎn)化外植體到生長(zhǎng)為綠苗的轉(zhuǎn)化率大幅度提高。并且運(yùn)用了溫室嫁接方法，嫁接轉(zhuǎn)基因組培苗，提高了再生棉株的成活率，共獲得成活再生轉(zhuǎn)基因植株45株。 (2)采用PCR和RT-PCR檢測(cè)技術(shù)分別在整合水平和表達(dá)水平上對(duì)再生植株進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)T1代轉(zhuǎn)基因棉花進(jìn)行檢測(cè)，最終確定陽(yáng)性植株16株，轉(zhuǎn)化率達(dá)35.5％。對(duì)其接種棉花枯萎病

3、菌強(qiáng)致病力菌株，表現(xiàn)為一定的抗病性。 (3)接菌后，轉(zhuǎn)snc1基因棉株和非轉(zhuǎn)化棉株差異明顯。在接菌早期POD、SOD活性與棉花枯萎病抗性呈正相關(guān)，PAL活性也在接菌第三天達(dá)到峰值，而CAT活性與接菌時(shí)間呈負(fù)相關(guān)。病程相關(guān)蛋白PR-2和PR-3有表達(dá)。snc1轉(zhuǎn)基因棉花的根莖部侵填體和膠質(zhì)體分布、以及韌皮部和接菌的非轉(zhuǎn)基因棉花相比，有顯著差異。 以上結(jié)果表明通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，snc1基因已經(jīng)整合到棉花基因組中，并有表達(dá)。經(jīng)