流式細(xì)胞儀在豬鏈球菌黏附細(xì)胞研究中的應(yīng)用.pdf

1、流式細(xì)胞儀（FCM）是一種在功能水平上對(duì)單個(gè)細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析或分選的檢測(cè)儀器。它能高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)測(cè)量細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)。豬鏈球菌（Streptococcus suis）是一種重要的人畜共患病原菌。其中豬鏈球菌2型（SS2）是最常見(jiàn)也是毒力最強(qiáng)的血清型。豬鏈球菌2型不僅可引起豬腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥、肺炎和突然死亡，還可感染相關(guān)人員并致死。
　　 本研究以革蘭氏陽(yáng)性菌豬鏈球菌2型（SS2）為

2、研究模型，采用CFDA-SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測(cè)試劑盒標(biāo)記SS2，將帶有CFDA-SE綠色熒光的SS2分別與Hep-2細(xì)胞和RAW巨噬細(xì)胞作用，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析，比較豬鏈球菌2型野生株與突變株的差異，以期找出能與豬鏈球菌2型黏附相關(guān)的基因。同時(shí)用常規(guī)平板計(jì)數(shù)方法檢測(cè)SS2黏附Hep-2細(xì)胞和RAW巨噬細(xì)胞，將統(tǒng)計(jì)結(jié)果與流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果表明CFDA-SE能較好的標(biāo)記SS2，標(biāo)記所需時(shí)間短，并且菌體內(nèi)熒光

3、穩(wěn)定。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果與平板計(jì)數(shù)法結(jié)果呈顯著相關(guān)。但流式細(xì)胞儀檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用低，結(jié)果精確，重復(fù)性好等。本實(shí)驗(yàn)分別比較了野生型SC19和突變株SSP、2706、11-12、196B對(duì)細(xì)胞的黏附能力。結(jié)果表明SS2野生型SC19對(duì)Hep-2細(xì)胞黏附能力較強(qiáng)，對(duì)RAW細(xì)胞黏附能力一般；突變株SSP缺失的表面蛋白與黏附能力關(guān)系不明顯；2706和196B所缺失的表面蛋白與黏附能力關(guān)系較密切。突變株11-12是缺失限制于修復(fù)系統(tǒng)中限制基因