利用芝麻內生細菌防治芝麻立枯病.pdf

1、由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)侵染芝麻引起的芝麻立枯病是一種嚴重的土傳病害，廣泛分布于我國各芝麻種植區(qū)。生產上控制該病害主要采用施用化學殺菌劑的方法，但對環(huán)境危害嚴重。目前，在尚缺乏有效抗病品種的情況下，利用內生細菌及其代謝產物對芝麻立枯病進行生物防治，不僅能克服以上不足，而且具有防效穩(wěn)定、環(huán)保和安全等優(yōu)點。本研究以立枯絲核菌為靶標菌，以從不同種植區(qū)芝麻苗根部分出的內生細菌為研究對象，對內生細菌的分離、生防細菌的篩

2、選、內生細菌的定殖及內生細菌的特性等進行了初步的研究，篩選出對芝麻立枯病有生防效果的內生菌。主要研究結果如下： 利用表面消毒涂布平板的方法，從大田72份不同品種健康芝麻苗根內獲得內生細菌399株，結果顯示，同一種植區(qū)不同芝麻品種中內生菌的數量和種類存在差異；不同種植區(qū)同一芝麻品種中內生菌的數量和種類存在差異。 通過平板對峙培養(yǎng)法，利用PDA、KBM和MYG等3種不同的培養(yǎng)基，以分離到的399株內生細菌為出發(fā)菌株，篩選對立

3、枯絲核菌有拮抗性的菌株。結果在3種培養(yǎng)基上共獲得210株對立枯絲核菌(Rsolani)有拮抗性的菌株，占供試菌總數的52.6％。 溫室盆栽生防試驗，初步建立了篩選芝麻立枯病拮抗菌的篩選體系，病原菌與土的添加比例為1:1000(W/W)。利用該體系，通過拌菌法活體篩選芝麻立枯病拮抗性菌株，以平板篩選出的210株菌為供試菌株，共獲得6株對芝麻立枯病有生防效果的拮抗菌株；編號分別為B16、b10、D31、e23、G10、110，其中菌

4、株G10的生防效果最高達52％。對菌株b10和G10進行了田間小區(qū)生防試驗，防效分別為31.8％和42.5％。 分別以殼聚糖(Chitosan)和幾丁質(Chitin)作為唯一碳源，利用透明圈法測定了210株內生細菌產殼聚糖酶(Chitosanase)和幾丁質酶(Chitinase)的能力，結果顯示42株內生細菌具有產殼聚糖酶的能力，5株菌具有產幾丁質酶的能力，分別占分離總數20％和2％；利用牛奶平板測定了拮抗菌產蛋白酶(Pro

5、lease)的情況，共165株產蛋白酶，占分離菌總數的78％。 對盆栽篩選出的6株生防菌的特性進行研究，結果顯示菌株G10有產殼聚糖酶的能力，I10有產幾丁質酶的能力，6株菌都具有產蛋白酶的能力；另外，測定了6個菌株在PDA平板上對于西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium)，西瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)，小麥全蝕病菌(Gaeumannoyces grammis vat.trit

6、ici)，油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)等菌的抑制能力，結果顯示6株菌均表現出廣譜的抑菌活性；同時，對G10菌株進行了KBM培養(yǎng)基液體搖瓶發(fā)酵，測定其發(fā)酵液中殼聚糖酶活，結果顯示，發(fā)酵24h時酶活最高達1.7U/mL活力單位。 通過水瓊脂法和灌根法兩種方式，利用膠體殼聚糖作為唯一碳源的選擇性培養(yǎng)基測定了G10菌株在芝麻根系內部的定殖動態(tài)，發(fā)現G10菌株在芝麻根部可以長期定殖。分別利用培養(yǎng)特征、形