外源一氧化氮供體硝普鈉對小麥種子萌發(fā)早期β-淀粉酶的影響.pdf

1、本文以淀粉類作物小麥（Triticum aestivum L.）為研究對象，發(fā)現(xiàn)β-淀粉酶的專一性抑制劑α-環(huán)糊精對小麥種子進(jìn)行浸種處理，發(fā)現(xiàn)可以明顯抑制小麥種子萌發(fā)，說明β-淀粉酶在小麥種子萌發(fā)早期起著重要的作用（至少在前24小時）；同時0.5 mmolL-1 SNP單獨(dú)處理可以明顯提高小麥種子的萌發(fā)，而二者共同處理小麥種子發(fā)現(xiàn)α-環(huán)糊精對SNP處理也有一定的抑制效應(yīng)。進(jìn)一步分析小麥種子內(nèi)的淀粉酶活性及淀粉含量發(fā)現(xiàn)，SNP處理后能夠明

2、顯提高萌發(fā)前期小麥種子的總淀粉酶活性（萌發(fā)6小時差異最為顯著），且種子內(nèi)淀粉含量也較對照處理低。在此過程中未測得α-淀粉酶活性，而運(yùn)用β-淀粉酶特異性底物測定其活性，結(jié)果表明SNP處理可以提高小麥種子體內(nèi)總β-淀粉酶活性?？紤]到具有還原性的SNP可能將無活性的結(jié)合型β-淀粉酶轉(zhuǎn)化為有活性的自由型β-淀粉酶，進(jìn)而分別測定自由型及結(jié)合型β-淀粉酶，發(fā)現(xiàn)SNP處理主要通過提高了自由型β-淀粉酶的活性而提高了總的β-淀粉酶活性；與之相比，還原劑

3、β-巰基乙醇處理則僅僅是通過結(jié)合型向自由型轉(zhuǎn)化而提高總的β-淀粉酶活性。結(jié)合NO清除劑cPTIO共同處理發(fā)現(xiàn)，cPTIO在一定程度上逆轉(zhuǎn)了SNP對β-淀粉酶活性的提高，而對還原劑β-巰基乙醇處理沒有顯著的影響。
　　 進(jìn)一步通過半定量RT-PCR試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SNP能夠提高β-淀粉酶基因轉(zhuǎn)錄本，同時Western blotting結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SNP處理明顯誘導(dǎo)了β-淀粉酶蛋白的表達(dá)，而SNP與NO專一性清除劑cPTIO及轉(zhuǎn)錄抑制劑放線

4、菌素D共處理均可以顯著逆轉(zhuǎn)上述轉(zhuǎn)錄本和蛋白水平的變化。免疫電鏡亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示，β-淀粉酶蛋白主要定位于小麥胚內(nèi)的蛋白儲藏體，并可能附著在淀粉粒上，SNP處理增加了β-淀粉酶蛋白的含量及分布，同時還原劑β-巰基乙醇處理也得到了類似的結(jié)果，但不及SNP處理明顯，SNP與NO專一性清除劑cPTIO共處理結(jié)果同上述試驗(yàn)結(jié)果保持一致，其中β-淀粉酶蛋白的含量及分布恢復(fù)至對照水平。
　　 上述的研究結(jié)果表明，外源NO供體SNP在小麥種子