水產(chǎn)品中亞甲基藍及其代謝物多殘留檢測方法的研究.pdf

1、亞甲基藍屬噻嗪類染料，在獸醫(yī)中主要用作消毒劑與解毒劑。由于其對防治淡水魚的水霉病、紅嘴病、小瓜蟲病等都有很好的療效，自從孔雀石綠、結(jié)晶紫等三苯甲烷類染料被禁用于水產(chǎn)養(yǎng)殖后，亞甲基監(jiān)成了一種較好的替代品。由于研究發(fā)現(xiàn)這種染料及代謝物有致畸作用，且在日本與美國，并未允許用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，其在水產(chǎn)品中的殘留受到廣泛重視。目前有關(guān)亞甲基藍檢測方法包括分光光度法、液相色譜法及毛細管電泳等，主要針對亞甲基藍原藥，同時檢測水產(chǎn)品中亞甲基藍及其代謝物天青A

2、，天青B，天青C殘留的文獻未見報道。因此，有必要對水產(chǎn)品中亞甲基藍及代謝物的檢測進行研究。 本文對高效液相色譜法和超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定水產(chǎn)品中亞甲基藍及其代謝物進行了研究和比較。高效液相色譜法的檢出限為2.0μg/kg。但其不能夠定性被測物質(zhì)，往往會因為陽性物質(zhì)的誤認導致定量測定存在誤差。液質(zhì)聯(lián)用法的檢出限是1.0μg/kg。其質(zhì)譜檢測器的靈敏度相比較高效液相的檢測器的高，可以大大的提高檢測的穩(wěn)定性、準確性、重現(xiàn)性、檢

3、出限。 首先，比較了不同的還原劑以及酸堿對亞甲基籃穩(wěn)定性的影響，發(fā)現(xiàn)無色亞甲基藍常溫下就比較容易被氧化為亞甲基藍，亞甲基藍在酸性條件下相對穩(wěn)定。同時，還比較了不同的溫度條件、不同的加熱時間等對人工投藥白鯽魚及小白鼠樣品中亞甲基監(jiān)及其代謝物穩(wěn)定性的影響，發(fā)現(xiàn)樣品中先加入5mL對甲苯磺酸-乙酸銨緩沖溶液(PH3.0)70℃恒溫水浴加熱15min，再按原方法進行處理可以明顯提高亞甲基藍的回收率。 其次，對高效液相色譜儀的檢測波

4、長、色譜柱、流動相等儀器條件，以及液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的色譜柱、柱溫、流動相、梯度洗脫條件、質(zhì)譜參數(shù)等儀器條件進行了優(yōu)化，使儀器達到最佳狀態(tài)。 在優(yōu)化樣品前處理條件方面，通過比較不同提取劑和不同提取方法等的提取效果，確定了乙腈-對甲苯磺酸-乙酸銨緩沖溶液為提取溶液，樣品勻漿3min后，在溫度70℃超聲15 min的提取方法，提取液經(jīng)正己烷除脂，二氯甲烷反提取，Supelco DSC-MCAX固相萃取小柱提純與凈化，優(yōu)化了洗脫液，討

5、論了有無過膜的影響；在高效液相色譜法分別對空白活鰻、黃魚、蝦樣品進行了0.005、0.020和0.50mg/kg3個水平加標回收試驗，方法回收率在75.9％～93.2％之間，相對標準偏差為3.33％～11.86％，方法檢出限為2.0μg/kg，符合組織樣品處理的真實度和精密度；對于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法分別對空白活鰻、烤鰻、黃魚、蝦樣品在1.0、2.0、4.0、10.0μg/kg4個不同濃度水平上分別進行加標回收實驗，方法回收率為75.5