水產(chǎn)品中多種喹諾酮類藥物殘留量檢測方法的研究.pdf

1、喹諾酮類（Quinolones）藥物是一類人工合成的人畜共用抗生素類藥物，對革蘭氏陰性菌和陽性菌、支原體、衣原體等有抗菌作用，常被用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中的病害防治。隨著人們對食品安全問題的關(guān)注，漁藥殘留問題不僅成為各國相關(guān)部門關(guān)注的焦點，也是普通民眾關(guān)心的社會問題。近年來常用于水產(chǎn)品中藥物殘留的檢測方法主要有：酶聯(lián)免疫測定法、毛細管電泳法、氣相色譜法、高效液相色譜法和聯(lián)用技術(shù)。其中，高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是目前應(yīng)用較多的方法，但是大部分方

2、法僅限于測定一種或少數(shù)幾種喹諾酮類藥物。本論文旨在建立水產(chǎn)品中同時檢測多種喹諾酮類藥物的高效液相色譜法和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。主要進行以下4方面研究：
　　 1）研究建立同時檢測水產(chǎn)品中6種喹諾酮類藥物殘留量的高效液相色譜法。根據(jù)高效液相色譜的特點，比較了不同的液相色譜柱對該類藥物的分離效果，考察了對分析效果有重要影響的流動相組成及配比、pH、流速、柱溫、最適發(fā)射和激發(fā)波長等液相色譜條件；對前處理過程中樣品的提取、凈化步驟進

3、行了對比優(yōu)化；通過對方法的檢測限和加標回收率的驗證，考察方法的穩(wěn)定性、準確度和適用范圍。經(jīng)反復(fù)實驗探索，最終確定了以酸化乙腈溶液提取樣品中殘留的恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、噁喹酸和氟甲喹，正己烷脫脂，Varian Bond Elut C18固相萃取小柱凈化，經(jīng)Zorbax Elipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）柱分離，用高效液相色譜熒光檢測法測定，外標法定量。實驗結(jié)果顯示，標準品線性關(guān)系良好，測

4、得各種藥物加標回收率均在75.0％以上，環(huán)丙沙星、恩諾沙星、諾氟沙星和氧氟沙星檢測限為5 μg/kg，噁喹酸和氟甲喹檢測限為10 μg/kg，相對標準偏差均在10.00％以內(nèi)。
　　 2）建立了同時檢測水產(chǎn)品中19種喹諾酮類藥物殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。試樣中19中喹諾酮類藥物用甲酸-乙腈溶液(1:99,V/V)提取，乙腈飽和正己烷凈化，用含2 mmol/L乙酸銨的0.2％甲酸-乙腈溶液為流動相進行梯度洗脫，SRM掃描方

5、式進行測定，外標法定量。1、5、20 μg/kg 3種濃度水平下進行加標回收實驗，每個水平重復(fù)測定6次，平均回收率為76.1％～116.0％，相對標準偏差3.20％～13.10％?？瞻讟悠分刑砑?9種1 μg/kg的喹諾酮類藥物標準溶液，經(jīng)測定其中17種藥物重復(fù)測定平均回收率可達到75.0％以上，氟羅沙星和吡哌酸在2 μg/kg濃度下重復(fù)測定平均回收率可達到75.0％以上，表明17種喹諾酮類藥物檢測限可達到1 μg/kg，氟羅沙星和吡哌

6、酸檢測限可達到2 μg/kg。最后選取青蟹、鱸魚、蝦、鰻魚、草魚、鮑魚、甲魚和牡蠣，在5 μg/kg加標濃度下進行驗證測定，回收率在77.6％～102.0％，RSD在13.00％以內(nèi)。
　　 3）探討了上述兩種檢測方法的不確定度來源并對其進行了分析評定，對測量結(jié)果的可靠性有了一個直觀的描述，對結(jié)果的質(zhì)量進行了更加完整的定量描述。通過對測量結(jié)果的不確定度分析找到實驗過程中容易對結(jié)果造成較大影響的因素，從而采取相應(yīng)措施減小或避免這些

7、影響。經(jīng)分析評定，發(fā)現(xiàn)對測量結(jié)果影響較大的不確定度分量主要來源于標準品的配制過程和加標回收的影響，這兩個環(huán)節(jié)的檢測過程中需引起重視。
　　 4）建立的水產(chǎn)品中6種喹諾酮類藥物檢測的高效液相色譜法已制定成行業(yè)標準，并已報送農(nóng)業(yè)部標準管理部門等待審定，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法也將制定成地方標準。
　　 本課題建立的針對水產(chǎn)品中多種喹諾酮類藥物殘留量的兩種檢測方法，樣品前處理方法簡便、準確，可同時快速檢測多種該類藥物殘留量，既