血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子B融合蛋白的表達(dá)和純化研究.pdf

1、研究背景與目的：VEGF-B作為一個(gè)重要的細(xì)胞內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，具有多種重要的生理功能。 本研究通過(guò)克隆人VEGF-B cDNA來(lái)構(gòu)建原核表達(dá)載體，并進(jìn)行高效表達(dá)和純化，利用基因工程技術(shù)來(lái)生產(chǎn)重組蛋白。 材料與方法：根據(jù)GenBank中人VEGF-B成熟態(tài)的cDNA序列，結(jié)合表達(dá)載體pET-28a的特點(diǎn)設(shè)計(jì)、合成一對(duì)特異性引物。采用PCR的方法擴(kuò)增人成熟VEGF-B蛋白cDNA片段，然后將其定向克隆到載體pET-28a中，構(gòu)

2、建原核表達(dá)重組載體pET-28a-VEGF-B；重組載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α擴(kuò)增、提取后，用PCR、限制性?xún)?nèi)切酶酶切以及DNA序列測(cè)定等方法進(jìn)行鑒定。鑒定正確的陽(yáng)性pET-28a-VEGF-B重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，通過(guò)K+抗性篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的陽(yáng)性工程菌；以IPTG誘導(dǎo)工程菌高效表達(dá)重組蛋白VEGF-B，利用His-tag親合層析、瓊脂糖凝膠層析對(duì)重組VEGF-B蛋白進(jìn)行分離純化。 結(jié)果： 1、成功的構(gòu)