血管內皮生長因子調節(jié)機制的研究.pdf

1、本研究分為兩部分:
　　第一部分:FHL1與Smad4協(xié)同抑制VEGF信號通路
　　血管內皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）在缺血，急慢性炎癥，以及腫瘤及創(chuàng)傷等血管生成異常疾病中起著重要作用。很多因子可以調節(jié)VEGF啟動子活性及VEGF的表達。FHL1(four and a halfLIM domains1)與Smad4便是其中2個可以調節(jié)VEGF啟動子活性及VEGF

2、的表達的因子。FHL-1隸屬于LIM-only蛋白家族，這個家族可以調節(jié)基因轉錄、細胞增殖、分化與凋亡。Smad4是一種抑癌基因，最早發(fā)現(xiàn)于胰腺癌第4位點基因缺失(DPC4)。本研究為了確定FHL1與Smad4是否可以協(xié)同抑制VEGF信號通路。結果顯示過表達的FHL1與Smad4可以協(xié)同抑制VEGF信號通路，而敲低內源性表達的Smad4與FHL-1則會刺激VEGF信號通路，并且敲低內源性Smad4表達會消除FHL-1介導的抑制VEGF啟

3、動子活性作用。結論，本研究證實了FHL1與Smad4可以協(xié)同調節(jié)VEGF信號通路，可能發(fā)現(xiàn)了一種新的腫瘤的進展與轉移機制。
　　第二部分:MARK1對VEGF信號通路的調節(jié)
　　本研究通過熒光素酶活性實驗從704個轉錄調節(jié)因子中篩選出可以抑制VEGF啟動子活性的Mark1蛋白。
　　微管親和力調節(jié)酶(microtubule affinity-regulating kinase，MARK)最初從小鼠腦組織中純化出來，具有

4、絲氨酸蘇氨酸激酶活性。MARK蛋白屬于AMPK/Snf1亞家族CaMKⅡ激酶組，有著保守結構域結構可以分為6個結構域，分別是:1.N端，2.催化域，3.普通停靠區(qū)域，4.泛素相關區(qū)域，5.沉默區(qū)，6.C端尾巴。
　　接著本研究證實了Mark1抑制VEGF啟動子活性成劑量依賴方式，并且同時通過Real-time PCR證實Mark1抑制VEGF啟動子活性，構建了VEGF啟動子突變體，利用熒光素酶活性實驗證實VEGF啟動子-800/-