腦缺血后血管內皮生長因子的表達及保護作用研究.pdf

1、第一部分腦梗死動物模型的制備及MRI與TTC染色對腦梗死體積的評價目的:用線栓法成功制備大鼠大腦中動脈閉塞動物模型,并觀察MRI成像和經典TTC染色兩種方法對梗死體積的評價是否一致,以探討MRI成像是否可代替TTC染色用于動物實驗的系列研究.方法:線栓法制作大鼠局灶性左側大腦中動脈閉塞模型,分別于缺血后6h,12h,24h進行神經功能缺損評分、T2加權MRI成像,隨后腦切片進行TTC染色,分別計算用MRI和TTC染色兩種方法測得的梗死灶

2、體積占對側大腦半球體積的百分比.結論:T2加權MRI成像和TTC染色對梗死體積的評價有很好的一致性,MRI成像能夠反映腦缺血的組織病理變化,且更方便、快捷,是活體重復評價腦梗死的手段,為一系列治療實驗的評價提供更多的便利.第二部分腦缺血后VEGF及受體表達和血管形成關系研究目的:觀察腦缺血后不同時間點VEGF及受體表達與微血管密度的關系.方法:應用免疫組織化學技術檢測缺血后3h、6h、24h、3d、7d的VEGF、及受體FLK-1的表達

3、情況,并用RT-PCR技術檢測了VEGF mRNA的表達時相.微血管密度的測定用層粘連蛋白免疫組化法,然后用圖象分析系統(tǒng)對陽性細胞數(shù)和陽性血管數(shù)進行半定量分析.結論:腦缺血后VEGF及受體的表達與微血管密度的增多可能是機體對抗缺血性腦損傷的一種血管再生的代償性的生理性反應,這種內源性微血管密度的增加是梗死灶的血運再建根源,也是外源性治療手段的基礎.第三部分皮質應用VEGF對腦缺血大鼠的保護作用研究目的:探討皮質應用VEGF對腦缺血大鼠的

4、血管源性反應和神經保護作用,研究不同劑量效應和不同時間效應對腦梗死體積、神經功能缺損評分、微血管密度、腦水腫程度、細胞凋亡等指標的影響.方法:實驗1先將大鼠制作成左側大腦中動脈閉塞模型,于缺血后1h開始往左側皮質以0.5ul/min速度緩慢注射VEGF164,注射20分鐘,濃度分別為10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml,.每只大鼠各注射3次,每天一次,注射3天,注射時間分別為梗死后1h,24h,48h.對照組只注射PBS.于梗

5、死后7d進行指標觀察.梗死體積的測定用T2加權磁共振成像,神經功能缺損程度用大鼠5分制評分法,微血管密度的測定用層粘連蛋白免疫組化法,腦水腫程度用稱重法評定,細胞凋亡用TUNEL法,另外用電鏡觀察了組織的超微結構和有無過度增殖等.實驗2先將大鼠制作成左側大腦中動脈閉塞模型,于缺血后1h開始注射濃度30ug/ml的VEGF164,速度同上,對照組只注射PBS.于缺血后6h觀察神經功能缺損評分、梗死體積、微血管密度、腦水腫程度、細胞凋亡等指