不同條件下九孔鮑免疫防御因子的差異性.pdf

1、本文對(duì)九孔鮑在副溶血弧菌感染過程中以及在低氧脅迫和饑餓脅迫條件下機(jī)體細(xì)胞和體液免疫防御因子的變化,九孔鮑野生與養(yǎng)殖群體免疫防御因子及生化遺傳差異性等內(nèi)容進(jìn)行研究。結(jié)果表明,在副溶血弧菌感染過程中九孔鮑血淋巴細(xì)胞當(dāng)中的吞噬細(xì)胞和體液中的一些免疫因子發(fā)揮重要作用,吞噬細(xì)胞存在呼吸爆發(fā)現(xiàn)象,呼吸爆發(fā)產(chǎn)生的活性氧和活性氮是殺滅被吞噬的異源生物的主要因素;胞內(nèi)MPO將H2O2轉(zhuǎn)化為次氯酸(hypochlorous acid,HOCl)和氯胺(ch

2、loramines,RNCl)等次生氧代謝產(chǎn)物,強(qiáng)化殺菌效果;胞內(nèi)ACP對(duì)異物發(fā)揮消化、降解作用;胞內(nèi)CAT則積極參與胞內(nèi)氧自由基的淬滅和清除作用;九孔鮑血淋巴液中的凝集素、溶菌酶、酚氧化酶等參與抗感染免疫過程,凝集素發(fā)揮免疫識(shí)別、免疫調(diào)理、凝集限制、免疫溶解等作用,溶菌酶發(fā)揮水解革蘭氏陽性菌的作用,酚氧化酶則可能參與病原微生物的抑制和免疫識(shí)別,九孔鮑存在通過細(xì)胞增殖強(qiáng)化免疫效應(yīng)的機(jī)制;此外,九孔鮑血淋巴液中還發(fā)現(xiàn)免疫球蛋白樣物質(zhì)IgG

3、-like,IgA-like,IgM-like,補(bǔ)體樣物質(zhì)C3-like,C4-like,C反應(yīng)蛋白樣物質(zhì)CRP-like等,它們與機(jī)體抗感染免疫應(yīng)答具有一定的相關(guān)性。
　　 平均體重為14.25g±2.21g的九孔鮑在水溫為22.1℃±1.3℃,鹽度為30.72±0.54,pH8.20±0.14的海水環(huán)境中,溶解氧含量由7.49±0.14 mg·L-1下調(diào)至2.53±0.16 mg·L-1后120內(nèi)并未見到個(gè)體死亡,而注射感染

4、5.0×105 cells-abalone-1副溶血弧菌后120h內(nèi)的累計(jì)死亡率高達(dá)91.11±7.70％,比對(duì)照組11.11±3.83％的累計(jì)死亡率高出80％,血淋巴的抑菌清除率下降至-(3340.47±298.57)％,顯而易見,低氧脅迫使得九孔鮑拮抗副溶血弧菌感染的抵抗力顯著下降。低氧(2.53±0.16 mg·L-1)脅迫下,九孔鮑血淋巴細(xì)胞數(shù)量(THC)下降30.62±4.87％、血淋巴細(xì)胞吞噬率下降62.77±5.79％、呼

5、吸爆發(fā)產(chǎn)生的超氧陰離子數(shù)量下降22.21±5.89％。低氧脅迫下九孔鮑血淋巴細(xì)胞內(nèi)MPO活性上升9.63±7.59％～22.90±13.73％、CAT活性提高7.68±6.83％～56.28±13.96％,反映出低氧脅迫下九孔鮑體內(nèi)應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的物質(zhì)氧化加劇,血淋巴細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量的活性氧自由基。溶解氧含量由7.49±0.14 mg·L-1下調(diào)至4.51±0.12 mg·L-1后九孔鮑120h內(nèi)的累計(jì)死亡率達(dá)到37.78±3.85％,血淋

6、巴抑菌率下降至-(883.56±123.22)％;THC、血淋巴細(xì)胞吞噬率、呼吸爆發(fā)產(chǎn)生的超氧陰離子O2-數(shù)量等最大降幅分別達(dá)到12.51±6.59％、21.90±15.84％、12.93±5.74％;MPO活性在原有水平的-(10.61±4.20)％～7.13±6.45％之間波動(dòng),CAT活性在-(5.17+18.08)％～16.26±10.85％之間變化。
　　 在水溫24.3℃±1.7℃、鹽度為30.42±1.63、pH值為

7、8.15±0.11環(huán)境條件下,饑餓脅迫20d九孔鮑尚能存活。在停食5d時(shí),九孔鮑血淋巴液蛋白含量不僅沒有下降,甚至略有升高,而7d后,九孔鮑血淋巴液蛋白質(zhì)含量逐漸大幅度下降,由此推測,九孔鮑在饑餓脅迫早期并沒有動(dòng)用體蛋白作為能源物質(zhì),而饑餓7d后,體蛋白被大量消耗于機(jī)體的生命維持。饑餓脅迫狀態(tài)下九孔鮑血淋巴細(xì)胞吞噬活性下降、血淋巴細(xì)胞呼吸爆發(fā)水平下降、體液溶菌酶活性、凝集活性下降、抗感染免疫機(jī)能下降。但是,九孔鮑經(jīng)歷5d時(shí)間的饑餓,血淋

8、巴抗菌清除效率、血淋巴細(xì)胞吞噬活性、血淋巴細(xì)胞呼吸爆發(fā)產(chǎn)生的超氧陰離子水平、體液溶菌酶活性等免疫指標(biāo)都不僅變化不大,有時(shí)甚至略有升高,說明九孔鮑具有面對(duì)饑餓脅迫的應(yīng)激適應(yīng)機(jī)制,饑餓之初,由于營養(yǎng)不足,機(jī)體通過提高免疫機(jī)能加強(qiáng)來適應(yīng)環(huán)境、保護(hù)自我。饑餓脅迫持續(xù)時(shí)間超過7d,這種本能的逆境適應(yīng)方式和機(jī)能維持終因體內(nèi)的營養(yǎng)狀況嚴(yán)重不足和體內(nèi)資源的過度消耗而改變和衰退。饑餓脅迫下的九孔鮑血淋巴液中的溶菌酶活性、凝集活性下降可能由體液蛋白含量下降

9、引起,胞內(nèi)顆粒性物質(zhì)減少則可能是血淋巴液中溶菌酶及凝集素活性減弱的直接原因。
　　 對(duì)九孔鮑野生與養(yǎng)殖群體的細(xì)胞與體液免疫因子進(jìn)行比較,結(jié)果表明:九孔鮑野生群體與養(yǎng)殖群體之間、養(yǎng)殖鮑的提純復(fù)壯群體與養(yǎng)殖性狀退化群體之間的免疫因子及機(jī)體免疫防御機(jī)能均有顯著的差異性。養(yǎng)殖鮑的提純復(fù)壯群體(養(yǎng)殖10個(gè)月,個(gè)體大小為51.8mm～59.2mm)細(xì)胞與體液免疫因子活性都明顯高于養(yǎng)殖性狀退化的養(yǎng)殖群體(養(yǎng)殖20個(gè)月,個(gè)體大小為37.4mm～

10、43.1mm)(p＜0.01),與野生群體(個(gè)體大小為67.7mm～76.7mm)相比,九孔鮑提純復(fù)壯群體的細(xì)胞免疫因子活性略高于野生群體,體液免疫因子活性則明顯低于野生群體。九孔鮑血淋巴細(xì)胞在吞噬活動(dòng)中引發(fā)呼吸爆發(fā)產(chǎn),生活性氧的水平與九孔鮑自身生理、環(huán)境溫度以及異物數(shù)量等因素有顯著的相關(guān)性(p＜0.01)。環(huán)境溫度由25℃下降至18℃,九孔鮑的細(xì)胞與體液免疫因子活性都有明顯的下降。養(yǎng)殖九孔鮑退化群體在25℃和18℃溫度條件下血淋巴液的

11、抗菌活力水平差異性不明顯。酚氧化酶存在于九孔鮑血淋巴液中,但,活性水平不高,在各類九孔鮑群體之間的差異性也不明顯。
　　 對(duì)深圳野生與養(yǎng)殖、廣東碣石養(yǎng)殖及南澳野生4個(gè)九孔鮑群體8種酶共16個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行了等位酶檢測分析。研究表明,以P0.95為標(biāo)準(zhǔn),上述4個(gè)九孔鮑群體的位點(diǎn)Sod-1、Aat、Me、Mdh-1、Est-1、Est-2為多態(tài),多態(tài)位點(diǎn)比例為37.5％;野生群體的觀察雜合度分別為:0.1604(深圳野生)、0.1604(

12、南澳野生),養(yǎng)殖群體的觀察雜合度分別為:0.1521(廣東碣石養(yǎng)殖)、0.1562(深圳養(yǎng)殖);野生群體的期望雜合度分別為:0.1697(深圳野生)、0.1766(南澳野生),養(yǎng)殖群體的期望雜合度分別為:0.1534(廣東碣石養(yǎng)殖)、0.1557(深圳養(yǎng)殖);野生群體的平均有效等位基因數(shù)分別為:1.3633(深圳野生)、1.3943(南澳野生),養(yǎng)殖群體的平均有效等位基因數(shù)分別為:1.3072(廣東碣石養(yǎng)殖)、1.3120(深圳養(yǎng)殖)。