KEGT基因?qū)浼拘筒萜翰莸霓D(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因草坪草的耐鹽性鑒定.pdf

1、冷季型草坪草以其綠期長(zhǎng)、草坪質(zhì)量高，具有美化和觀賞功效，并能為人們的娛樂(lè)、休閑和體育運(yùn)動(dòng)提供場(chǎng)所，而受到親睞。高羊茅和多年生黑麥草是目前種植廣泛的冷季型草坪草種。近些年來(lái)，由于世界范圍內(nèi)的水資源緊缺，土地的鹽堿化、次生鹽漬化的不斷加劇，使人們開(kāi)始重視抗旱、耐鹽堿草坪草品種。這些草坪草品種不僅可以減少澆灌次數(shù)，節(jié)約水資源；還可以擬制土壤返鹽。另外，我國(guó)土壤鹽漬化也十分嚴(yán)重，而如何利用大面積鹽堿地是我國(guó)目前需要解決的問(wèn)題。研究草坪草對(duì)逆境脅

2、迫的反應(yīng)機(jī)制,提高草坪草的抗逆境脅迫能力，培育抗旱、耐鹽等抗逆性強(qiáng)的草坪草新品種，對(duì)嚴(yán)重缺水區(qū)域、鹽堿區(qū)域有很大的應(yīng)用價(jià)值。
　　 本研究的目的是通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)技術(shù)將Los5、ABAR、NCED3、ICE1、CBF3基因轉(zhuǎn)入高羊茅和多年生黑麥草，提高植物抗旱、耐鹽能力；以及對(duì)轉(zhuǎn)基因草坪草進(jìn)行盆栽和田間的實(shí)驗(yàn)。本研究的主要結(jié)果如下：
　　 1、對(duì)本實(shí)驗(yàn)室的高羊茅和多年生黑麥草的胚性愈傷組織高頻誘導(dǎo)與再生體系進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果

3、表明：（1）最佳分化培養(yǎng)基MS+6-BA2mg/L+2,4-D0.2mg/L+水解酪蛋白0.5g/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉7g/L(pH5.8)；（2）最適侵染時(shí)間為15分鐘。（3）最佳共培養(yǎng)時(shí)間為2d，抗性愈傷誘導(dǎo)率最高可以達(dá)到23.5％。
　　 2、應(yīng)用本研究?jī)?yōu)化的遺傳轉(zhuǎn)化方法，首次獲得了轉(zhuǎn)Los5、ABAR、NCED3、ICE1、CBF3基因的高羊茅和多年生黑麥草植株。通過(guò)除草劑篩選獲得了36株獨(dú)立來(lái)源的轉(zhuǎn)化植株。選取部

4、分植株進(jìn)行PCR檢測(cè)。結(jié)果表明，外源基因已整合到轉(zhuǎn)基因植株的基因組。
　　 3、對(duì)本實(shí)驗(yàn)室所獲得的T1代種子進(jìn)行盆栽試驗(yàn)，經(jīng)鹽脅迫處理，檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株在不同鹽濃度條件下生理生化指標(biāo)，結(jié)果表明：在鹽脅迫條件下，轉(zhuǎn)化株與對(duì)照株相比在脯氨酸含量、超氧化物歧化酶活性(SOD)、過(guò)氧化氫酶活性(POD)、丙二醛含量、類胡蘿卜素含量(Car)變化上均出現(xiàn)顯著差異，并隨著濃度增大和時(shí)間的延長(zhǎng)，這種差異越明顯。最終表明，T1轉(zhuǎn)基因植株仍然具有耐