幾種草坪草轉基因及體細胞無性系變異的研究.pdf

1、　　本試驗以成熟種子為試材，優(yōu)化了日本結縷草愈傷組織誘導及分化再生及農桿菌介導遺傳轉化的關鍵因子，在此基礎上進行了bt基因轉化日本結縷草的研究；在建立了高羊茅高效再生體系的基礎上，將體細胞無性系變異技術與誘變技術相結合進行了高羊茅優(yōu)質突變體的研究。結果如下：1)以破除休眠的日本結縷草和高羊茅成熟種子種子為外植體，通過單因素和多因素試驗確定了兩種草坪草愈傷組織誘導、繼代和分化的最佳培養(yǎng)基。結果表明，高羊茅愈傷組織的誘導培養(yǎng)基為含2,4-D

2、5mg/L+6-BA0.2mg/L的MS培養(yǎng)基；分化培養(yǎng)基為含6-BA3mg/L的MS培養(yǎng)基；生根培養(yǎng)基為不含激素的1/2MS培養(yǎng)基。2)將獲得的胚性愈傷組織進行γ輻照處理，經再生后獲得了一批日本結縷草和高羊茅的葉形、葉色、株高等突變體。對其中的黃葉高羊茅種子后代進行空間技術處理。結果表明，空間技術引起的SP1生理損傷較輕，SP2未發(fā)現葉綠體缺失突變，但株葉形態(tài)、熟期和耐熱性變異豐富，從中篩選、鑒定了半矮稈、匍匐性、細葉、遲熟、耐熱性等

3、優(yōu)質抗逆黃葉高羊茅突變體。3)以gus基因瞬時表達為指標，對農桿菌介導日本結縷草成熟種子誘導的愈傷組織轉化體系及其影響因子進行了系統(tǒng)性研究。并研究了不同抗生素的抑菌效果和日本結縷草愈傷組織的本底耐受性。結果表明，250-500mg/L的羧芐青霉素可以較好地抑制農桿菌的生長。日本結縷草對潮霉素比卡那霉素更敏感，將愈傷組織接種于含潮霉素200mg/L的誘導培養(yǎng)基上，兩周后愈傷組織褐化死亡率超過90﹪。　　4)在建立了高頻再生體系和高效轉化