旱稻耐鹽基因的轉(zhuǎn)化及鑒定.pdf

1、該研究采用基因工程的手段將1-磷酸甘露醇脫氫酶(mtlD)基因和甜菜堿醛脫氫酶(BADH)基因轉(zhuǎn)入早稻品種,以期培育出耐鹽的轉(zhuǎn)基因旱稻,解決鹽堿地的開發(fā)利用問題,同時(shí)帶動(dòng)旱稻的大面積推廣.以胚性愈傷組織作為受體材料,利用基因槍轟擊法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別將mtlD基因和BADH基因?qū)牒档?對(duì)外源基因在早稻基因組中的整合和表達(dá)情況進(jìn)行了研究,同時(shí)在轉(zhuǎn)化過程中,對(duì)影響轉(zhuǎn)化的各個(gè)因素(外植體、篩選壓、啟動(dòng)子等)作了進(jìn)一步探討,從而進(jìn)一步完善了高

2、效的旱稻遺傳轉(zhuǎn)化體系.愈傷組織經(jīng)兩輪篩選后,挑取抗性愈傷組織進(jìn)行預(yù)分化、分化,最后獲得轉(zhuǎn)mtlD基因植株122株,轉(zhuǎn)BADH基因植株56株.對(duì)轉(zhuǎn)基因再生植株進(jìn)行PCR檢測發(fā)現(xiàn),PCR陽性株分別為91株和48株.對(duì)PCR陽性株進(jìn)一步作雜交驗(yàn)證,結(jié)果絕大部分出現(xiàn)雜交信號(hào),表明mtlD基因和BADH基因已經(jīng)整合到了旱稻基因組中.選取PCR陽性株進(jìn)行耐鹽性實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株能在0.75％NaCl的脅迫下正常生長,而在1.0％NaCl的脅迫下,