中國(guó)葡萄屬野生種抗黑痘病基因RAPD標(biāo)記作圖.pdf

1、該研究以中國(guó)野生葡萄和歐洲葡萄種間雜交組合88-110(83-4-96×粉紅玫瑰)的雙親及F<,1>代群體為試材,在田間人工接種鑒定的基礎(chǔ)上,對(duì)雙親及F<,1>代進(jìn)行RAPD分析,依據(jù)RAPD分析結(jié)果,進(jìn)行抗黑痘病基因的RAPD標(biāo)記作圖.同時(shí)對(duì)獲得的特殊RAPD標(biāo)記S353-1400進(jìn)行測(cè)序及酶切分析,取得的主要結(jié)果如下:1.采用田間人工接種黑痘病病原菌的方法,研究了中國(guó)野生葡萄和歐洲葡萄種間雜交組合88-110(83-4-96×粉紅玫

2、瑰)F<,1>群體對(duì)黑痘病的抗性.結(jié)果表明,44株F<,1>代中,抗黑痘病的為20株,感病的為24株,經(jīng)卡平方檢測(cè)(X<'2>=0.2045*),符合1:1比例分離.88-110組合F<,1>代,44株中有41株的感病指數(shù)在雙親之間分布,占93.18%.2.以88-110組合親本83-4-96和粉紅玫瑰為模板,444個(gè)10bp隨機(jī)引物有341個(gè)引物能在雙親間擴(kuò)增出差異條帶;然后用341個(gè)隨機(jī)引物對(duì)葡萄黑痘病的抗性材料混合池和感病材料混合

3、池為模板進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增出符合1:1或3:1比例的RAPD標(biāo)記用于構(gòu)建遺傳連鎖圖譜研究.利用Mapmaker/Exp3.0軟件,在LOD=3.0設(shè)置下,24個(gè)標(biāo)記可形成一個(gè)連鎖群,共覆蓋469.3cM,位點(diǎn)間平均距離19.55cM,最小距離5.9cM,最大距離為36.4cM,與抗黑痘病基因最近的標(biāo)記為S353-1400(5.9cM).3.將S353-1400用回收試劑盒回收,連接T載體并克隆,篩選、鑒定重組克隆.對(duì)重組質(zhì)粒抽提、純化和測(cè)序

4、.測(cè)序結(jié)果為S353-1400序列的實(shí)際長(zhǎng)度是1371bp.4.用Wingene231DNA分析軟件對(duì)S353-1400序列的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)進(jìn)行了分析,有141個(gè)(可識(shí)別6個(gè)及其以上序列堿基位點(diǎn))限制性內(nèi)切酶在S353-1400序列上存在酶切位點(diǎn),并且在1147bp處有一EcoRI酶切位點(diǎn).5.在GenBank中對(duì)S353-1400的DNA序列進(jìn)行了相似性分析,表明序列與其它生物體序列同源性較小,為中國(guó)野生葡萄基因組所特有.S353-