草魚肝胰臟結(jié)構(gòu)分析及喹乙醇對(duì)肝胰臟細(xì)胞的毒理研究.pdf

1、本研究主要從組織化學(xué)入手，對(duì)草魚肝胰臟的結(jié)構(gòu)進(jìn)行準(zhǔn)確的分析研究。并在此研究的基礎(chǔ)上，探究了喹乙醇對(duì)肝胰臟的毒理影響。 草魚(Ctenopharyngodon idellus)屬鯉科魚類，其肝臟和胰腺合生在一起，合稱肝胰臟(Hepato-pancreas)。對(duì)草魚肝胰臟細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和試驗(yàn)研究，首先需要準(zhǔn)確了解草魚肝胰臟的結(jié)構(gòu)，特別是了解其肝臟與胰腺的空間結(jié)構(gòu)關(guān)系。大部分草食性鯉科魚類肝胰臟結(jié)構(gòu)為胰腺組織分散成小葉形散布于肝組織

2、中。本研究發(fā)現(xiàn)草魚肝胰臟結(jié)構(gòu)為胰腺組織被肝組織包裹于內(nèi)，分散于肝組織之中，與肝組織一起構(gòu)成整個(gè)肝胰臟結(jié)構(gòu)。草魚具有完整的內(nèi)分泌胰腺，而且其內(nèi)分泌胰腺明顯地分為a，β兩區(qū)，與大部分草食性鯉科魚類肝胰臟結(jié)構(gòu)類似。與Matty總結(jié)五種魚類肝臟、胰腺形態(tài)結(jié)構(gòu)相比較，草魚肝胰臟結(jié)構(gòu)另有特色，草魚肝胰臟可以劃分在Matty所總結(jié)的肝胰臟型中，但其肝胰臟中肝臟、胰腺混合在一起，肉眼難以區(qū)分，肝臟、胰腺仍屬各自獨(dú)立的器官，具有各自獨(dú)立的生理功能，而其內(nèi)

3、分泌胰腺多彌散與肝胰臟整體器官之外，散布與肝胰臟與前腸之間。 本研究表明，DMEM/F<,12>更適合草魚肝胰臟細(xì)胞生長(zhǎng)。草魚肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞與胰腺外分泌實(shí)質(zhì)細(xì)胞具有相似的生長(zhǎng)率，利用生長(zhǎng)曲線難以區(qū)分出生長(zhǎng)速度的差異。與哺乳動(dòng)物比較，草魚肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞與胰腺外分泌實(shí)質(zhì)細(xì)胞可能具有更高的同源性。 本研究以草魚肝胰臟為試驗(yàn)材料，通過原代細(xì)胞培養(yǎng)，組織化學(xué)，免疫熒光細(xì)胞化學(xué)等實(shí)驗(yàn)方法，應(yīng)用透射電子顯微鏡(TEM)，激光共聚焦掃描顯微鏡(

4、LSCM)等手段，觀察三種不同濃度的喹乙醇(Olaquindox)對(duì)體外原代培養(yǎng)的草魚肝細(xì)胞和胰腺外分泌部細(xì)胞的毒理影響。結(jié)果表明，高于0.3 ug.mL<'-1>濃度的喹乙醇可顯著導(dǎo)致草魚肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞和胰腺外分泌部實(shí)質(zhì)細(xì)胞的脂肪積累。通過LSCM直接觀察比較，大量添加喹乙醇可抑制草魚胰腺外分泌部細(xì)胞Trypsinogen的合成，當(dāng)添加濃度大到一定程度時(shí)，可完全阻斷草魚胰腺外分泌部細(xì)胞Trypsinogen的合成。結(jié)合體內(nèi)試驗(yàn)與體外試驗(yàn)

5、，可推測(cè)，在生產(chǎn)實(shí)踐中大量添加喹乙醇可抑制草魚肝胰臟Trypsinogen的合成與分泌，對(duì)魚體的消化功能造成不利影響，但還需要進(jìn)一步的體外試驗(yàn)來直接證明。而且，在鯉科魚類飼養(yǎng)實(shí)踐中，關(guān)于喹乙醇副作用抑制劑的研發(fā)，還有待于通過進(jìn)一步通過體內(nèi)外試驗(yàn)來解決。另外，大量添加喹乙醇可導(dǎo)致草魚胰腺外分泌部細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，使其細(xì)胞膜橫截面由圓形、橢圓形轉(zhuǎn)變成多邊形，這種趨勢(shì)隨著喹乙醇濃度的逐漸增加而增大，這與現(xiàn)有報(bào)道中關(guān)于喹乙醇的致畸作用相吻合，為