畢業(yè)論文—苯氧甲基青霉素提取工藝研究

1、<p><b>　　摘 要</b></p><p>　　生產(chǎn)實際出發(fā)，以青霉素 V 及其提取工藝為研究對象，查閱了大量國內(nèi)外發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)，利用現(xiàn)有實驗及生產(chǎn)條件，對青霉素 V 的物性參數(shù)及其提取工藝過程進(jìn)行了研究。</p><p>　　測定了在溫度 25℃時，青霉素 V 飽和水溶液 pH 為 2.95，其效價為 844u/ml； 離解常數(shù) Ka=0.00

2、421，pKa=2.38?？疾炝饲嗝顾?V 在乙酸丁酯-水相間的分配系數(shù)。實驗發(fā)現(xiàn)了水是青霉素 V 在乙酸丁酯中溶解的一個重要助溶劑，得出了在乙酸丁酯-水系統(tǒng)中水份對青霉素 V 在乙酸丁酯中的溶解度的影響規(guī)律曲線。實驗還考察了丁醇中水份對青霉素 V 鉀在丁醇中的溶解度的影響、青霉素 V鉀常溫下在水中的溶解度等。</p><p>　　關(guān)鍵詞： 苯氧甲基青霉素 青霉素 V 提取 沉淀 乙酸丁酯</p>

3、<p><b>　　Abstract</b></p><p>　　This thesis focuses on the character parameters of pheoxymethylpenicillin and its extraction process referring to the related reference. Character parameters

4、of saturated penicillin V water solution were mensurated at 25℃: pH=2.95, potency=844 u/ml,ionization constant K a=0.00421，pKa=2.38. Its distribution coefficient between the phases in the butyl acetate-water system was s

5、tudied.Water was discovered to be an important complex solubilizer for penicillin V to dissolve in butyl acetate.And the w</p><p>　　Keywords: henoxymethylpenicillin, penicillin V butyl acetate</p>

6、<p><b>　　目 錄</b></p><p>　　第1章 文獻(xiàn)綜述1</p><p>　　1.1 青霉素研究概況1</p><p>　　1.1.1 青霉素 V 的降解規(guī)律3</p><p>　　1.1.2 青霉素 V 的溶解性質(zhì)3</p><p>　　1.2 影響青霉素

7、V 成品質(zhì)量的雜質(zhì)4</p><p>　　1.3 青霉素 V 提取技術(shù)研究5</p><p>　　1.3.1 溶劑萃取法5</p><p>　　1.3.2 沉淀法[2]8</p><p>　　1.3.3 離子交換法和吸附法8</p><p>　　1.3.4 青霉素提取新方法研究9</p>&l

8、t;p>　　第2章 青霉素 V 物性參數(shù)研究12</p><p>　　2.1 材料及方法12</p><p>　　2.1.1 試驗材料12</p><p>　　2.1.2 試驗方法12</p><p>　　第3章 實驗結(jié)果與討論14</p><p>　　3.1 青霉素 V 酸晶體形狀14</p&

9、gt;<p>　　3.2 測定青霉素 V 在水中的離解常數(shù) Ka14</p><p>　　3.3考察青霉素 V 在乙酸丁酯-水相間的分配系數(shù)15</p><p>　　3.4 乙酸丁酯中水份對青霉素 V 在乙酸丁酯中的溶解度的影響16</p><p>　　3.5 丁醇中水份對青霉素 V 鉀在丁醇中的溶解度的影響17</p><

10、p>　　3.6 青霉素 V 鉀在常溫下在水中的溶解度19</p><p><b>　　結(jié) 論20</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)21</b></p><p><b>　　致 謝23</b></p><p><b>　　第1章 文獻(xiàn)綜述<

11、;/b></p><p>　　1.1 青霉素研究概況</p><p>　　1929 年 Flemming 發(fā)現(xiàn)了青霉素（Penicillins）,這是世界上最著名的抗生素，也是人類應(yīng)用于臨床的第一種抗生素。青霉素是臨床抗感染的首選藥物之一，長期以來,國內(nèi)外臨床一致證實青霉素具有抗菌作用強、療效高、毒性低等優(yōu)點,目前仍廣泛應(yīng)用于臨床,而且在治療很多感染疾病中仍為首先藥物[1]。<

12、/p><p>　　青霉素是由青霉菌所產(chǎn)生的一類抗生素的總稱，它們是由不同菌種或同一菌</p><p>　　種在不同培養(yǎng)條件下培養(yǎng)所得的同一類化學(xué)物質(zhì)。青霉素發(fā)酵液中含有 5 種以上天然青霉素（如青霉素 F、G、X、K、F 和 V 等），其共同的化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖 1-1</p><p><b>　　所示：</b></p><p>

13、<b>　　S</b></p><p>　　R—COHN CH3</p><p><b>　　CH3</b></p><p><b>　　N</b></p><p>　　O COOH</p><p>

14、;　　圖1-1 青霉素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式</p><p>　　Fig 1-1 chemical structure of Penicillanic</p><p>　　由圖 1-1 可見,青霉素分子是由側(cè)鏈酰基與母核兩大部分組成,母核為 6-氨基</p><p>　　青霉烷酸(6-Amino PenicillanicAcid ,簡稱 6-APA)</p>&

15、lt;p>　　[1]其結(jié)構(gòu)式如圖1-2：</p><p><b>　　S</b></p><p>　　H2N CH3 </p><p><b>　　CH3</b></p><p>　　O N COOH</p><p&g

16、t;　　圖1-2 6-氨基青霉烷酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式</p><p>　　Fig 1-2 chemical structure of 6-Amino Penicillanic Acid</p><p>　　不同的側(cè)鏈 R 構(gòu)成不同類型的青霉素。當(dāng) R 為芐基時則稱為卞基青霉素又</p><p>　　稱為青霉素 G，在臨床中用得最多，青霉素 G 的鈉鹽或鉀鹽是治療革蘭氏陽性

17、</p><p>　　菌的首選藥物，對革蘭氏陰性菌也有強大的抑制作用。青霉素 G 在水溶液中很不穩(wěn)定,尤其在酸性或堿性的水溶液中很容易分解或異構(gòu)化，臨床上主要作為注射和輸液用。</p><p>　　當(dāng)R為苯氧甲基時稱為苯氧甲基青霉素，又稱青霉素V，它最初是由Behrens[3]等于 1947 年采用生產(chǎn)青霉素 G 菌種，在發(fā)酵過程中加入正-(2-羥乙基)-苯氧乙酰胺特殊前體試制成功，并于

18、1955 年生產(chǎn)出口服制劑并應(yīng)用于臨床。文獻(xiàn)報道，青霉素 V 與青霉素 G 相比，雖然它只在側(cè)鏈中多了一個氧原子，但它的一些性質(zhì)發(fā)生了很大的變化，比如在酸性水溶液中降解比青霉素 G 緩慢，而在堿性水溶液中降解卻比青霉素 G 迅速等。因此青霉素 V 的生產(chǎn)工藝雖然與青 G 很相似，但某些參數(shù)和設(shè)備需要作一定的調(diào)整或改進(jìn)。青霉素 V 對酸穩(wěn)定性高，不易被胃酸破壞，口服吸收好，其口服劑尤其適合兒童使用。而且作注射針劑使用時，可不做皮試，安全性

19、高。目前，美國、英國、德國等國家均有規(guī)模生產(chǎn)，并在美國、日本、西班牙、荷蘭和西歐等一些國家的臨床上廣泛使用[2]。李家泰等對國內(nèi)生產(chǎn)的青霉素 V 片劑進(jìn)行了安全性評價研究，得出了不做皮試口服青霉素 V 片治療細(xì)菌感染是安全有效的結(jié)論[4]。青霉素 V 除直接使用外，其鉀鹽也在臨床上使用。1995 年中國首次從美國進(jìn)口青霉素 V 鉀鹽片劑，經(jīng)患者試用觀察和臨床驗證，</p><p>　　S <

20、/p><p>　　OCH2-COHN CH3</p><p><b>　　CH3</b></p><p>　　O COOH </p><p>　　圖 1-3 青霉素V的化學(xué)結(jié)構(gòu)式 </p><p>　　Fig 1-3 ch

21、emical structure of 6-Amino Penicillanic Acid</p><p>　　1.1.1 青霉素 V 的降解規(guī)律</p><p>　　據(jù)文獻(xiàn)記載，在酸性情況下，青霉素 V 降解緩慢；在堿性情況下，青霉素 V降解速度比青霉素 G 快得多；而且，青霉素 V 的降解是一級反應(yīng)。微量水份易使青霉素 V 失活。在氯仿中青霉素 V 受其親電子性影響易降解，在發(fā)酵過程中

22、，其降解過程受磷酸鹽催化影響。</p><p>　　1955 年報道了如下的實驗：溶液濃度均為 350u/ml 的青霉素 V 和青霉素 G，分別在溫度 20℃，pH2 的情況下保持 3 小時，結(jié)果青霉素 G 全部失活，青霉素V 尚有 80-85%的活性。本試驗說明在酸性情況下，青霉素 V 比青霉素 G 降解緩慢得多。正是青霉素 V 的這一特性，決定了青霉素 V 可以口服。</p><p>

23、　　1.1.2 青霉素 V 的溶解性質(zhì)</p><p>　　青霉素 V 游離酸在水中溶解度很小，而易溶于有機溶劑如：乙酸丁酯、苯、氯仿、丙酮和醚中。青霉素 V 鉀、鈉鹽易溶于水和甲醇，可溶于乙醇，在丙醇、丁醇、丙酮、乙酸丁酯、吡啶中難溶或不溶[7]。Beilstein 有機手冊登載的六十年代測得的離解常數(shù) Ka的常用對數(shù)pKa為2.74（25℃）。</p><p>　　青霉素 V 游離酸在

24、乙酸丁酯中的溶解度是有限的，這也是為什么青霉素 V生產(chǎn)中提煉設(shè)備及管道易出酸晶的原因。在這一點上，青霉素 V 與青霉素 G 不同。青霉素 G 在乙酸丁酯中的溶解濃度可達(dá) 100 萬 u/ml 以上而仍未達(dá)到飽和。青霉素 V 游離酸在含水丁醇中的最高溶解度約為 10 萬 u/ml 以上，但當(dāng)系統(tǒng)中存在雜質(zhì)時，有可能使青霉素 V 在這些有機溶劑中的溶解度提高。青霉素 V 鉀在水中的溶解能力是 1:1.5（重量比），即一份水可溶解 1.5 份

25、青霉素 V 鉀，此時的水相濃度大約在 65-75 萬 u/ml 之間，比青霉素 G 低，且可看到水溶液中懸浮著晶體。物質(zhì)的溶解度往往受到助溶劑的影響。研究人員發(fā)現(xiàn)在乙酸丁酯中加入水溶性溶劑可以提高青霉素 V 在乙酸丁酯中的溶解度。</p><p>　　1.2 影響青霉素 V 成品質(zhì)量的雜質(zhì)</p><p>　　在提取過程中，一些影響青霉素 V 提取的雜質(zhì)如果不徹底去除，就會一直帶入青霉素

26、V 成品中，這些雜質(zhì)一般包括：青霉素 V 噻唑酸，青霉素 V 脫羧噻唑酸，苯氧乙酸，4-羥基青霉素 V 等。其中青霉素 V 噻唑酸，青霉素 V 脫羧噻唑酸是在發(fā)酵和提取過程中由青霉素 V 在中性或堿性條件下降解而形成的。苯氧乙酸是青霉素 V 發(fā)酵的前體物質(zhì)，由于苯氧乙酸在青霉素發(fā)酵生物合成過程中，不屬于優(yōu)先被利用的前體，因此苯氧乙酸在發(fā)酵液中的濃度需要維持得比較高，所以在發(fā)酵液中有 1-3%（g/ml）的苯氧乙酸存在，經(jīng)過多次提取后，仍

27、有少量殘留到成品中。</p><p>　　據(jù) Merck Index 記載，苯氧乙酸易溶于醇類、醚類、苯、二硫化碳、冰乙酸中，微溶于水，在水中的溶解度為 1 份約溶于 75 份水中，pKa為 3.12。</p><p>　　1998 年有羅馬尼亞學(xué)者連續(xù)發(fā)表一系列報道，用液膜分離青霉素 V 與苯氧乙酸，并且建立了數(shù)學(xué)模型[8]。但考慮到青霉素 V 是個老品種，售價低廉，此技術(shù)應(yīng)用起來比較昂

28、貴，操作復(fù)雜，用于酶解生產(chǎn)半合成中間體有一定可能性，不太適合當(dāng)前發(fā)酵液中分離青霉素 V 的現(xiàn)狀。</p><p>　　青霉素 V 成品中的另一個重要雜質(zhì)是 4-羥基青霉素 V，它是前體苯氧乙酸被菌絲氧化為 4-羥基苯氧乙酸以后，結(jié)合到青霉素母核上形成的分子，在苯環(huán)對位它比青霉素 V 分子多一個氧原子。據(jù)報道，4-羥基苯氧乙酸比苯氧乙酸優(yōu)先與母核結(jié)合。年輕的菌絲對前體氧化能力弱，僅用它構(gòu)成青霉素 V 分子，隨著菌齡

29、的增大，氧化能力漸漸增加[7]，因此在青霉素 V 發(fā)酵過程中，待放批號得到的濾液中，4-羥基青霉素 V 含量較少，但前體苯氧乙酸較多；而發(fā)酵終點的大罐批號，4-羥基青霉素 V 含量較多，但前體苯氧乙酸相對減少。由于 4-羥基苯氧乙酸在發(fā)酵液中一般占 3-10%左右，其性質(zhì)與青霉素 V 極其類似，很難除去，因此在多次提純以后，仍有部分殘留到成品中。</p><p>　　在青霉素研究的早期，人們就很重視 4-羥基青霉

30、素 V 的研究，1957 年就有從青霉素 V 發(fā)酵液中提取 4-羥基青霉素 V 的報道[9]，操作如下：將青霉素 V 粗鉀鹽溶解到水中，調(diào) pH 到 2，將青霉素 V 濾掉，母液依次用乙酸丁酯和 pH6.5的磷酸緩沖液萃取，冷卻，除去結(jié)晶析出的苯氧乙酸鈉，在 pH2 用苯萃取。分離苯層后，中和到 pH6.9，對水層酸化，形成油狀沉淀。用乙酸丁酯在 pH2 萃取，加入以丁醇溶解的醋酸鉀，過濾，用丁醇和水洗滌，就產(chǎn)生了一個苯氧乙酸鉀鹽和 4

31、-羥基青霉素 V 鉀鹽的混合物，前者通過丙酮沉淀除去，在母液中加入更多丙酮，形成結(jié)晶性沉淀，除去丙酮，加入丁醇，真空濃縮，即生成第二組分。兩種組分溶于含水丁醇，除水重結(jié)晶，碳處理后，進(jìn)一步在丙酮中重結(jié)晶，熔點151～159℃（降解）。此外，在青霉素 V 發(fā)酵液還存在有色物質(zhì)和高分子雜質(zhì)，對它們的性質(zhì)和行為的研究都比較少，但是用活性炭脫色和洗滌都可以將其部分或全部除去。</p><p>　　1.3 青霉素 V 提取

32、技術(shù)研究</p><p>　　目前國內(nèi)外有關(guān)青霉素 V 生產(chǎn)提取的文獻(xiàn)報道較少，并且大多是早期的研究工作。國內(nèi)許多公司基本上沿用青霉素 G 的生產(chǎn)工藝來生產(chǎn)青霉素 V，只是將部分工藝條件進(jìn)行了調(diào)整。溶劑萃取法和沉淀法是目前青霉素 V 生產(chǎn)過程中主要的分離提純方法。</p><p>　　1.3.1 溶劑萃取法</p><p>　　青霉素 V 的 pKa為 2.7，且耐

33、酸性能好。在較低的 pH 值時，大部分青霉素V 以未解離酸分子形式存在，在水中溶解度較低但易溶于有機溶劑，因此可用溶劑萃取技術(shù)提取青霉素V[2]。溶劑萃取法提取青霉素雖然有對設(shè)備要求高、過程易乳化、溶媒消耗量相對較大等缺點，但是此技術(shù)相對成熟，具有濃縮倍數(shù)大、生產(chǎn)周期短、效率高和易實現(xiàn)高效的連續(xù)生產(chǎn)等優(yōu)點，故仍是青霉素 V 提取普遍采用的方法[2]。</p><p>　　溶劑萃取分物理萃取和反應(yīng)萃取兩大類。目前在

34、青霉素提取過程中普遍采用的是碳-鍵合氧給予體類型的萃取劑，即碳?xì)浠衔锖腿〈奶細(xì)浠衔锶軇?pH 值為 2.0 左右進(jìn)行萃取青霉素，萃取收率服從分配定律，稱為物理萃取[2]。Zhukovskaya 等[15]在總結(jié)大量實驗數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上，提出了乙酸丁酯溶劑物理萃取青霉素的分配系數(shù)：D = 47/(1+10pH-2.75) 。</p><p>　　從一些國外的專利來看，工業(yè)上青霉素 V 常以鉀鹽的形式提取且和青霉

35、素 G鹽提取工藝相似，由于青霉素 V 耐酸性好，不易降解，因此采用乙酸丁酯等溶劑萃取法生產(chǎn)青霉素 V 比生產(chǎn)青霉素 G 具有優(yōu)勢而普遍采用。但是國內(nèi)目前由于青霉素 V 提取技術(shù)不成熟，在工藝控制、收率和質(zhì)量上還與國外有一定的差距，有待進(jìn)一步研究[2]。反應(yīng)萃取是帶有化學(xué)反應(yīng)的萃取過程，即在溶劑與溶質(zhì)之間存在確定的化學(xué)計量關(guān)系的強溶劑化或離子反應(yīng)的萃取過程，可分為中性絡(luò)合萃取、陽離子交換萃取、離子締合萃取和協(xié)同萃取等。相對于物理萃取來說，

36、反應(yīng)萃取具有選擇性好等特點，因此近年來許多學(xué)者對其競相研究。常用于青霉素 V 反應(yīng)萃取的萃取劑主要是高分子脂肪胺類等[2]。</p><p>　　Reschkel 等使用脂肪胺或季銨鹽萃取劑，對在酸堿性溫和的條件下提取青霉素進(jìn)行了廣泛的研究，并指出青霉素酸(HP)和脂肪胺(A)反應(yīng)萃取的機理是中和反應(yīng)，溶解在有機相的胺與水相中的青霉素陰離子 P-和質(zhì)子 H+反應(yīng)，此方法可以改善萃取條件和效果[2]。</p&

37、gt;<p>　　Cascaval 等采用高相對分子質(zhì)量胺萃取劑 Amberlite LA-2 溶解在乙酸丁酯中反應(yīng)萃取青霉素 V，在兩相界面上可以形成疏水的復(fù)合物。試驗中發(fā)現(xiàn)水溶液的pH 值是影響反應(yīng)萃取的重要因素。在 pH 值低于 5 時，青霉素 V 的萃取收率為97~98%，在 pH 值為 7.5 時萃取收率僅為 20%。使用 LA- 2 和乙酸丁酯萃取青霉素 G 和青霉素 V 已經(jīng)成功地應(yīng)對此三相體系進(jìn)行了進(jìn)一步研

38、究，對比考察了傳統(tǒng)兩相體系與聚乙二醇-硫酸銨-乙酸丁酯構(gòu)筑的三相體系對實際生產(chǎn)中的苯氧甲基青霉素發(fā)酵濾液的萃取效果, 并且對苯氧甲基青霉素在三用于中試和工業(yè)規(guī)模的生產(chǎn)上[2]。方成開等開發(fā)了一種新型萃取劑 7045 及其與之配套的新萃取工藝[1] [16] [17],并進(jìn)行了提取青霉素 G 的試驗。他們認(rèn)為, 新工藝省去了廢液(萃余液) 蒸餾回收溶媒工序和廢溶媒提純工序, 有機相只需經(jīng)過簡單的再生處理就可直接返回萃取工序,可以大大節(jié)省能

39、源，而舊工藝中使用乙酸丁酯作萃取劑, 在萃余相中溶解度大, 因此廢液不能廢棄, 必須回收其中的乙酸丁酯, 同時經(jīng)過多次萃取、反萃之后, 廢溶媒也必須經(jīng)過</p><p>　　液-液-液三相體系(Three-Phase-System ) 是包含三個液相的萃取體系，是近年來提出并逐漸引起人們關(guān)注的新型萃取體系。研究主要針對復(fù)雜體系中多種目標(biāo)產(chǎn)物的分離和提純，是具有廣泛應(yīng)用前景的分離手段，是溶劑萃取研究熱點之一[18]

40、。陳繼等[19]于 2000 年首次提出由雙水相(aqueous two-phase-system ) 與有機相共同構(gòu)筑三相萃取體系( three-phase-extraction-system )，利用聚乙二醇-硫酸銨形成的雙水相與乙酸丁酯的組合形成三相體系，開發(fā)了三相一步法萃取青霉素的創(chuàng)新工藝。此體系將傳統(tǒng)兩相萃取體系(conventional two-phase-extraction-system ) 需要多步完成的分離純化過程集

41、中在一個萃取過程中完成, 簡化了現(xiàn)行的工藝流程, 提高了溶媒相的質(zhì)量指標(biāo)[18]。</p><p>　　液-液-液三相體系屬于復(fù)雜多相體系, 在三相一步法萃取青霉素新工藝的初步應(yīng)用研究中體現(xiàn)了該體系的一些特點和優(yōu)勢, 但是目前青霉素及其它生物物質(zhì)在三相體系中各相間的存在形式、分配規(guī)律和機理等方面與傳統(tǒng)兩相萃取之間的差異仍缺乏了解, 因此申淑鋒等相萃取體系相間分配與體系的 pH 之間的關(guān)系進(jìn)行了深入的研究[18]。

42、</p><p>　　采用構(gòu)筑的三相體系(由聚乙二醇-硫酸銨-乙酸丁酯形成的體系)萃取苯氧甲基青霉素發(fā)酵濾液，不需使用大量昂貴的破乳劑,僅經(jīng)過簡單的預(yù)處理后可以實現(xiàn)苯氧甲基青霉素在有機相定向富集和純化, 簡化了破乳、脫色等中間環(huán)節(jié),可以達(dá)到較好的分離效果, 下相中乙酸丁酯的含量明顯降低, 而且色素在中間相富集等方面, 與傳統(tǒng)兩相萃取相比，萃取率基本相當(dāng), 因此具有一定優(yōu)勢，但對專用萃取設(shè)備需要進(jìn)行研究。三相體系的

43、 pH 對苯氧甲基青霉素在三相體系相間的分配有顯著的影響。隨著體系 pH 的降低, 上相與下相分配比、上相與中相分配比顯著增加, 而中相與下相分配比呈緩慢下降趨勢；當(dāng) pH 降低到 3.0 以下時, 萃取率的變化比較平緩, 但苯氧甲基青霉素在上相的質(zhì)量分?jǐn)?shù)可達(dá)到 90%以上[18]。</p><p>　　三相萃取技術(shù)用于苯氧甲基青霉素發(fā)酵濾液的萃取可以有效地實現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)物與雜質(zhì)的分離, 便于與下游半合成青霉素中間體

44、生產(chǎn)工藝的耦合, 是使青霉素發(fā)酵液不經(jīng)工業(yè)鹽結(jié)晶階段直接生產(chǎn) 6-APA 或 7-ADCA 成為可能的技術(shù)之一。</p><p>　　1.3.2 沉淀法[2]</p><p>　　沉淀法是分離青霉素 V 酸的最簡單而經(jīng)濟的方法。青霉素 V 酸生產(chǎn)可以通過加入無毒的弱酸或部分有機強酸到青霉素V發(fā)酵濾液或鹽溶液中調(diào)節(jié)pH值獲得[20][21]</p><p>　　。酸性

45、相對較弱的酸離解常數(shù)常選擇在(1.3~6.6)×10-5的一元脂肪酸，如乙酸、丙酸等，或二元脂肪酸，如丁二酸等。強酸的離解常數(shù)至少為 1.7×l0-4如硫酸、鹽酸、磷酸、檸檬酸等。酸化過程中強酸的存在可以使青霉素 V 酸沉淀完全。為了獲得較高的收率，通常先加入弱酸，然后緩慢加入強酸或部分強酸與弱酸同時加入，大部分青霉素 V 酸沉淀后，加入剩余的強酸[2]。徐兵提供了一種青霉素 V 提純工藝[21]，該方法采用青霉素

46、V 發(fā)酵濾液加入有機酸或無機酸調(diào)節(jié) pH 值在 3.5 以下，得到青霉素 V 一次酸化沉淀；然后加入堿性物質(zhì)調(diào)節(jié) pH 值為 4.5～8.0，將青霉素 V 沉淀溶解得到青霉素 V 堿化液；經(jīng)活性炭脫色、過濾，濾液進(jìn)入噴霧干燥設(shè)備干燥，得到較純的青霉素 V 鹽固體物。為了得到質(zhì)量較好的青霉素 V 鹽，通常將青霉素 V 堿化液進(jìn)行二次酸化沉淀處理。此方法得到的低成本的青霉素 V 或鹽可作為制備 6-APA 的原料[2]。</p>

47、<p>　　利用沉淀法直接從發(fā)酵液中回收分離和提純青霉素 V 優(yōu)點很多，如節(jié)省或不用溶媒，收率高；操作費用降低；設(shè)備簡單，工藝路線短；4-羥基青霉素 V 酸化后存在液相中等。但是在青霉素 V 酸化過程易形成黏性的油狀物，過濾處理存在一定的問題[2]。</p><p>　　1.3.3 離子交換法和吸附法</p><p>　　Mahesh 等在研究 Amberlite XAD-l

48、6 和 Amberlite XAD-7 時發(fā)現(xiàn)，在較低的pH 值下，青霉素 V 可以吸附到中性的芳香族吸附劑上，并且隨著 pH 值的降低，青霉素 V 的吸附量增加，而在較高的 pH 值下，青霉素 V 易溶于水，幾乎沒有青霉素 V 被吸附的特點來吸附提取。但由于青霉素 V 是熱敏性物質(zhì)，且穩(wěn)定性差，離子交換法和吸附法由于操作周期較長而造成青霉素 V 的損失，所以只進(jìn)行了實驗室規(guī)模的研究[2]。</p><p>　　

49、1.3.4 青霉素提取新方法研究</p><p>　　1.3.4.1 反膠團萃取[17]</p><p>　　反膠團是一種新型生物活性物質(zhì)的分離方法, 最初應(yīng)用于具有鮮明等電點的氨基酸、蛋白質(zhì)類物質(zhì)的分離。吳子生等[22]在室溫和 pH5～8 的條件下進(jìn)行了青霉素 G 的反膠團相轉(zhuǎn)移提取研究, 提取率在 90% 以上。離子強度及 pH 對青霉素萃取率、反萃取率的影響不大, 但是離子強度對蛋

50、白質(zhì)的萃取率影響很大,因此可利用這些特點將雜蛋白除去。</p><p>　　1.3.4.2 外場強化萃取[17]</p><p>　　外場強化可以提高化工分離過程的分離效率。用電場來強化萃取過程, 可以改善液滴表面性質(zhì), 提高其傳質(zhì)系數(shù), 同時還能促進(jìn)分散的液滴凝并團聚, 縮短分相時間。Weatherley 等在實驗室研究了電場強化對二氯甲烷萃取青霉素的影響。實驗在高度為 0.65m ,直

51、徑為 25mm 的玻璃噴淋萃取柱中進(jìn)行, 青霉素發(fā)酵液經(jīng)靜電噴嘴噴出后, 作為分散相與在電場作用下的二氯甲烷逆流接觸, 完成萃取過程。結(jié)果表明, 該方法用于全發(fā)酵液的萃取可以提高界面?zhèn)髻|(zhì)速率, 分相困難的問題也可得到解決。在 pH4, 20kV 電場作用下, 青霉素的萃取率可以提高 5倍。電場強化萃取可作為青霉素全發(fā)酵液萃取過程中機械強化液-液接觸的替代方法。除電場強化外, 超聲技術(shù)與磁場強化技術(shù)也引起了研究人員的關(guān)注, 特別是磁場強化

52、技術(shù)用于發(fā)酵液中雜蛋白的回收分離具有現(xiàn)實意義。</p><p>　　1.3.4.3 微濾及超濾技術(shù)[17]</p><p>　　現(xiàn)行乙酸丁酯提取工藝中, 乳化問題直接影響青霉素的收率, 提取工藝的成敗很大程度上取決于此。現(xiàn)行工藝是靠在萃取過程中加入破乳劑來減輕乳化, 促進(jìn)分相, 以提高收率。但是, 每一種破乳劑的適用范圍有限, 由于發(fā)酵技術(shù)的不斷革新再加上技術(shù)保密等原因, 破乳劑的研發(fā)工作

53、很難適應(yīng)性質(zhì)不斷變化的發(fā)酵液, 而且, 這樣做會在乙酸丁酯中引入色素等雜質(zhì), 加重下游純化工藝負(fù)擔(dān),最終影響青霉素產(chǎn)品的質(zhì)量, 同時還有致產(chǎn)品毒性的可能性。此外, 破乳劑的使用也很難完全解決萃取效率降低的問題。因此, 提煉工藝向無破乳技術(shù)方向發(fā)展也就成了大勢所趨。</p><p>　　膜分離是一種先進(jìn)的新型分離技術(shù), 它是以膜作隔離, 借助外界能量或化學(xué)位能為推動力對多組分混合物或溶液進(jìn)行分離、濃縮、提純的過程。

54、與萃取等傳統(tǒng)的分離過程相比, 具有效率高、低能耗、無二次污染等優(yōu)點。目前, 大量的研究工作都是以膜分離技術(shù)為基礎(chǔ), 再融合其它分離技術(shù)開發(fā)無破乳劑分離技術(shù)。A dikane 等使用管式陶瓷膜微濾技術(shù)從發(fā)酵液中直接提純青霉素 G, 并研究了優(yōu)化分離條件。經(jīng)歷 12 個運行周期后, 青霉素的回收率高達(dá) 98% , 且操作通量的重現(xiàn)性好。研究發(fā)現(xiàn), 橫向流動速度、處理時間、處理體積對于青霉素的回收率都有十分重要的影響。橫向流動速度提高 2.9

55、 倍, 可在不降低提取率的情況下, 將分離周期縮短 41%。此外, 陶瓷膜強度大, 耐沖洗, 將其用于發(fā)酵液的處理可以提高膜的使用壽命, 降低成本,具有良好的發(fā)展前景。李十中等[23]以蛋白質(zhì)臨界乳化分子量概念為指導(dǎo), 采取超濾/萃取法對青霉素 G 的發(fā)酵濾液進(jìn)行處理。濾液經(jīng)超濾除去起乳化作用的生物高分子物質(zhì)后再用乙酸丁酯進(jìn)行萃取, 不僅從根本上解決了青霉素萃取過程中的乳化問題, 還可以減少硫酸的消耗量以及乙酸丁酯的損失。青霉</

56、p><p>　　為HFPS10, 濾液體積10000m l, 效價27308u/ml, 操作壓力0.1mPa, 操作溫度14℃。濃縮倍數(shù)為 10 時加 1000ml 水滲濾。目前制約該技術(shù)工業(yè)應(yīng)用的最大障礙在于膜的使用壽命不夠理想。要使超濾、微濾技術(shù)成功應(yīng)用于青霉素的工業(yè)分離過程中, 關(guān)鍵在于使用質(zhì)量高、價格相對合理的膜組件。這與膜材料行業(yè)的技術(shù)進(jìn)步程度息息相關(guān)。</p><p>　　1.3.

57、4.4 液膜分離技術(shù)[17]</p><p>　　液膜萃取技術(shù)用于青霉素提取可實現(xiàn)萃取/反萃取過程耦合, 是當(dāng)前青霉素分離領(lǐng)域的另一個研究熱點。用于青霉素提取的液膜萃取技術(shù)可分為乳化液膜(ELM )、支撐液膜(SLM )萃取兩大類。</p><p>　　與傳統(tǒng)的液-液萃取相比, 液膜萃取具有如下優(yōu)點： (1) 可以連續(xù)再生, 溶劑使用量很少；(2) 在萃取和轉(zhuǎn)移過程中，溶劑的損失很少；(3

58、) 只要兩水相間的 pH 梯度能夠維持，溶質(zhì)就可能逆濃度梯度轉(zhuǎn)移。就目前研究進(jìn)展來看，還需解決液膜穩(wěn)定性問題、乳化相腫脹、萃取劑流失問題以及完善高壓電場破乳技術(shù)，才能使乳化液膜技術(shù)得到廣泛的工業(yè)化應(yīng)用。</p><p>　　至于支撐液膜技術(shù)則需解決多孔介質(zhì)自身的傳質(zhì)阻力以及微孔內(nèi)兩相界面穩(wěn)定性等問題。</p><p>　　1.3.4.5 中空纖維膜非分散萃取技術(shù)[17]</p>

59、<p>　　中空纖維膜非分散萃取技術(shù)(HF)能夠克服液膜萃取穩(wěn)定性差的缺點，同時由于其非分散性使得該萃取過程不會產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，且傳質(zhì)效率較高，用于萃取性分離過程時，其過程設(shè)計及放大比傳統(tǒng)的分散型裝置簡單。Yang 等利用中空纖維膜(Celgard 膜)非分散萃取技術(shù)進(jìn)行了青霉素 G 的反應(yīng)萃取研究。結(jié)果表明，萃取過程的傳質(zhì)阻力主要在原料液中；反萃過程中的阻力比萃取過程要大 10 倍，但可以通過選擇親水性纖維膜來減小該阻力。

60、L azarova</p><p>　　等使用兩個中空纖維膜萃取器同時進(jìn)行大規(guī)模的青霉素模擬料液的反應(yīng)萃取和反萃應(yīng)用研究，對傳質(zhì)模型及工藝條件優(yōu)化進(jìn)行了深入探討并給出了工藝條件優(yōu)化建議。</p><p>　　該方法適用于青霉素類不穩(wěn)定生物物質(zhì)的全發(fā)酵液提取，價格低廉，是離心萃取的一個很好的替代方法，可以明顯地節(jié)能降耗。該方法目前僅限于實驗室規(guī)模的模擬料液研究，真實發(fā)酵液體系遠(yuǎn)比模擬體系復(fù)雜

61、，因此還需進(jìn)一步考察、完善。</p><p>　　第2章 青霉素 V 物性參數(shù)研究</p><p><b>　　2.1 材料及方法</b></p><p>　　2.1.1 試驗材料</p><p>　?。?）青霉素 V 鉀粉，純度 99.5％，華北制藥股份有限公司；</p><p>　　（2）乙酸

62、丁酯，分析純，北京化工廠；</p><p>　?。?）丁醇，分析純，北京化工廠；</p><p>　?。?）自動旋光儀，上海儀器廠；</p><p>　　（5）pH 計，德國梅特勒公司；</p><p>　?。?）DL-38 水份自動滴定儀，德國梅特勒公司；</p><p>　?。?）純化水，自制。</p>

63、<p>　　2.1.2 試驗方法</p><p>　　在生產(chǎn)中，為了快速測定效價（即每毫克藥物干粉的單位，當(dāng)是溶液時為每</p><p>　　毫升溶液的單位），常用旋光法測定效價。本實驗中，在不需要十分精確測定青</p><p>　　霉素 V 溶液濃度的情況下，亦采用旋光法測定效價。用自動旋光儀迅速測定溶</p><p>　　液

64、的旋光度，然后查旋光曲線，根據(jù)生產(chǎn)上的換算系數(shù)和公式將旋光度換算為效</p><p>　　價。因此在實驗前，首先要繪制準(zhǔn)確的青霉素 V 的旋光曲線，制定旋光法測定</p><p>　　效價的依據(jù)。旋光曲線的繪制方法見附錄一《旋光曲線的繪制》。經(jīng)驗換算公式</p><p><b>　　為：</b></p><p>　　乙酸

65、丁酯中：效價=旋光度×9800</p><p>　　丁醇中： 效價=旋光度×9090</p><p>　　水相中：效價在 7-9 萬之間，效價=旋光度×7600；效價在 13000u/ml 以下，</p><p>　　效價=旋光度×13000（用以測定廢酸水中青霉素 V 的含量）</p><p>　　2

66、.1.2.1 制備青霉素 V 酸</p><p>　　稱取青霉素 V 鉀粉 50g，在室溫條件下（25℃）溶于 1000ml 純化水中，緩慢滴加 10%（wt）稀硫酸于不斷攪拌的溶液中，調(diào)節(jié) pH=2.0～2.5，攪拌一小時后抽濾，用一定量純化水分次洗滌沉淀；依次檢測各部分水洗溶液的 pH 值，并以旋光法測定水洗溶液的效價。</p><p>　　2.1.2.4 乙酸丁酯中水份對青霉素 V

67、在乙酸丁酯中溶解度的影響</p><p>　　在實驗中發(fā)現(xiàn)，將青霉素 V 的干粉放置于分析純乙酸丁酯中攪拌，即使攪</p><p>　　拌很長時間也不溶解，測定乙酸丁酯的旋光度變化，發(fā)現(xiàn)折合為青霉素 V 只有 1</p><p>　　萬多單位，考慮到萃取時青霉素 V 在乙酸丁酯中效價大約在 7 萬左右，推測可</p><p>　　能是乙酸丁酯

68、中的水份在影響青霉素 V 在乙酸丁酯中的溶解度，因此設(shè)計以下</p><p><b>　　實驗。</b></p><p>　　在室溫條件下（25℃），取分析純乙酸丁酯，將制備好的干燥的青霉素 V 酸放置到乙酸丁酯中，用電磁攪拌，將水逐滴加入到系統(tǒng)中，用卡式滴定法測乙酸</p><p>　　丁酯中的水份，用旋光法測青霉素 V 在乙酸丁酯中的濃度。

69、</p><p>　　2.1.2.5 丁醇中水份對青霉素 V 鉀在丁醇中溶解度的影響</p><p>　　實驗方法同 2.1.2.4。取分析純丁醇，將制備好的干燥的青霉素 V 鉀粉放置到丁醇中，電磁攪拌，將水逐滴加入到系統(tǒng)中，用卡式滴定法測丁醇中水份，用旋光法測青霉素 V 在丁醇中的效價。</p><p>　　2.1.2.6 青霉素 V 鉀在水中的溶解度</p

70、><p>　　取純化水 100ml，在攪拌情況下，逐漸加入青霉素 V 鉀粉，直至水溶液中有少量懸浮晶體為止。</p><p>　　第3章 實驗結(jié)果與討論</p><p>　　3.1 青霉素 V 酸晶體形狀</p><p>　　實驗中拍到的青霉素 V 酸晶體形狀照片見下圖，有的晶體呈棒狀和片狀，但大部分不規(guī)則。</p><p&g

71、t;　　3.2 測定青霉素 V 在水中的離解常數(shù) Ka</p><p>　　控制稀硫酸的加入速度對青霉素 V 鉀鹽溶液進(jìn)行酸化沉淀，得到分散性較好的青霉素 V 酸漿液，抽濾；用 2500ml 的純化水分 5 次洗滌青霉素 V 酸沉淀。</p><p>　　表 2-1 給出了青霉素酸的水洗溶液的參數(shù)</p><p><b>　　。</b><

72、/p><p>　　表3-1 水洗溶液參數(shù)</p><p>　　Tab 2-1 parameters of water-washed solution</p><p>　　洗滌次數(shù) 1 2 3 4 5 </p><p>　　PH 3.01

73、2.94 2.95 2.95 2.95</p><p>　　效價（u/ml） 875 875 844 844 844 </p><p>　　試驗中洗滌用水量較大且攪拌充分，消除了水洗溶液不飽和帶來的誤差；當(dāng)水洗溶液的效價和 pH 值連續(xù)三次相近或相同，說明此時溶液是青霉素 V 的飽和溶液。</p><

74、;p>　　結(jié)果表明，當(dāng)青霉素 V 飽和水溶液在溫度 25℃時，pH 為 2.95，效價為 844</p><p>　　u/ml； 計算得 Ka=0.00421，pKa=2.38。</p><p>　　3.3考察青霉素 V 在乙酸丁酯-水相間的分配系數(shù)</p><p>　　青霉素 V 與青霉素 G 的萃取工藝及操作相似。一般認(rèn)為采用低溫（5℃～10℃）、低 pH

75、 值萃取(pH=1.8～2.2)，以達(dá)到最大萃取率。由于青霉素 V 的離解是一個動態(tài)平衡，當(dāng)分子</p><p>　　試驗號 1 2 3 4 5 6 7 8 9</p><p>　　丁酯相（u/ml）76440 74186 72814 62426 53998 45668 39102 28322 17640</

76、p><p>　　水相（u/ml） 906 938 906 750 625 562 531 438 312</p><p>　　PH 值 2.94 2.94 2.91 2.98 3.06 3.05 3.13 3.16 3.20</p><p>　　K表觀分配系數(shù) 84 79 80

77、83 86 81 74 65 57</p><p>　　K0 分配系數(shù) 341 290 416 488 502 — — — —</p><p>　　態(tài)的青霉素 V 被萃取到有機相時，離子態(tài)的青霉素 V 會向分子態(tài)轉(zhuǎn)化以維持平衡，一定范圍內(nèi) pH 的提高可以達(dá)到同樣的萃取效果；另外根據(jù)青霉素 V 酸本身的特點，試驗

78、中采用萃取條件為 pH=2.8～3.2，溫度為 25℃。試驗結(jié)果見表 2-2。從表 2-2 可看出，不同濃度的純凈青霉素 V 酸在丁酯-水相中的分配系數(shù) K0在 300～500 之間；pH 大于 3.0 時，表觀分配系數(shù) K 隨著青霉素 V 的濃度降低表觀分配系數(shù) K 呈下降趨勢。由于水相中溶有部分乙酸丁酯，對 pH 及濃度測定有微小影響；另外青霉素V 在室溫的降解也對測定和計算結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。在生產(chǎn)中青霉素 V 在體系中濃度很高，

79、環(huán)境或系統(tǒng)的微小變化對青霉素 V的活度影響很大，因此分配系數(shù)波動較大。</p><p>　　3.4 乙酸丁酯中水份對青霉素 V 在乙酸丁酯中的溶解度的影響</p><p>　　乙酸丁酯中水份對青霉素 V 在乙酸丁酯中的溶解度有一定的影響，在室溫</p><p>　　條件下（25℃）的實驗結(jié)果見下表 2-3。</p><p>　　表2-3 乙酸

80、丁酯中水份對青霉素V在乙酸丁酯-水系統(tǒng)中溶解度的影響</p><p>　　Tab 2-3 water effect to the solubility of penicillin V in butyl acetant-water system </p><p>　　試驗號 1 2 3 4 5 6 7 8</p>

81、<p>　　加水量（ml） 0 1 2 3 4 5 6 50</p><p>　　水份（%g/ml）0.092 0.52 0.94 1.23 1.24 1.29 1.26 1.26 </p><p>　　效價（u/ml） 18130 34251 52822 64729 66787 67179 67473 68

82、551</p><p>　　加水量對效價的影響趨勢見圖 2-2：</p><p>　　圖 2-2 加水量對青霉素 V 在乙酸丁酯中的效價的影響</p><p>　　將水份和效價相關(guān)聯(lián)可得圖 2-3：</p><p>　　圖 2-3 水份對青霉素 V 在乙酸丁酯中的效價的影響</p><p>　　從以上這些圖表可以看出，

83、青霉素 V 在含水量低的乙酸丁酯中溶解度很小，</p><p>　　當(dāng)乙酸丁酯中水份升高時，青霉素 V 在乙酸丁酯中的溶解度也逐漸升高，而當(dāng)</p><p>　　水份達(dá)到在乙酸丁酯中的飽和濃度時，此時出現(xiàn)乙酸丁酯和水相分層，青霉素 V</p><p>　　在乙酸丁酯中的溶解度也基本達(dá)到穩(wěn)定。</p><p>　　從圖中還可以看到乙酸丁酯中水份

84、與青霉素 V 在乙酸丁酯中飽和時的效價呈線性相關(guān)，也就是說與其飽和濃度線性相關(guān)。這可能是因為水分子和青霉素分子中都有羥基，氫鍵的形成降低了青霉毒 V 分子在乙酸丁酯中的能量，微量水份起到了穩(wěn)定青霉素 V 分子的作用，使青霉素 V 在乙酸丁酯中溶解度增大。在這里，微量水份對青霉素 V 在乙酸丁酯中的溶解起到助溶劑作用。</p><p>　　3.5 丁醇中水份對青霉素 V 鉀在丁醇中的溶解度的影響</p>

85、<p><b>　　實驗結(jié)果如下：</b></p><p>　　表 2-4 丁醇中水份對青霉素 V 鉀在丁醇中的溶解度的影響</p><p>　　試驗號 1 2 3 4 5 6</p><p>　　加水量（ml） 0 1 2

86、 3 4 6</p><p>　　水份（%g/ml） 1.35 2.5 3.36 4.46 5.2 7.65</p><p>　　旋光度（a） 0.06 0.17 0.29 0.51 0.95 2.56</p><p>　　效價（u/ml） 545.4 1545.3

87、 2636.1 4635.9 8635.5 23270.4</p><p>　　將水份和效價關(guān)聯(lián)成曲線可得圖 2-4。</p><p>　　由以上數(shù)據(jù)可以看出，丁醇中水份的微量增加可以迅速提高青霉素 V 鉀在丁醇中的效價，這說明其飽和濃度在迅速增加。當(dāng)水份在 3% （g/ml），青霉素</p><p>　　V 鉀在丁醇中達(dá)到飽和時，其效價大約為 2000u/m

88、l。如果結(jié)晶初始效價在 20 萬</p><p>　　u/ml 以上，結(jié)晶終點水份在 3%以下，則此時損失只有 1%左右，以此可以作為</p><p><b>　　結(jié)晶終點的判斷。</b></p><p>　　圖 2-4 水份對青霉素 V 鉀在丁醇中的效價的影響</p><p>　　3.6 青霉素 V 鉀在常溫下在水中的

89、溶解度</p><p>　　由實驗結(jié)果可知，青霉素 V 鉀在常溫下于水中的溶解度大約為每 15ml 水中可以溶解 10g 青霉素 V 鉀粉，測定其效價大約為 75 萬 u/ml。</p><p><b>　　結(jié) 論</b></p><p>　　本文以青霉素 V 及其提取工藝為研究對象，根據(jù)國內(nèi)外發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)及生產(chǎn)實際情況，進(jìn)行了大量的青霉素

90、V 物性參數(shù)實驗,總結(jié)這些工作，得出了以下主要結(jié)論:</p><p>　　(1) 在 25℃時，青霉素 V 在水中飽和時效價為 844 u/ml，pH 為 2.95；在水中的離解常數(shù) pKa=2.38；</p><p>　　(2) 純凈的青霉素 V 在乙酸丁酯-水相中的分配系數(shù) K0在 300～500 之間，pH</p><p>　　為 3.0 左右時，表觀分配系數(shù)

91、 K 約為 80。</p><p>　　(3) 乙酸丁酯中微量水份對青霉素 V 在乙酸丁酯中的溶解起到助溶作用，青霉素 V 在乙酸丁酯中的飽和濃度與乙酸丁酯中水份呈線性相關(guān)。</p><p>　　(4) 常溫下，丁醇中水份的微量增加可以迅速提高青霉素 V 鉀在丁醇中的飽和濃度。當(dāng)水份在 3%（g/ml）以下時，青霉素 V 鉀在丁醇中達(dá)到飽和時，其效</p><p>

92、　　價大約為 2000 u/ml。</p><p>　　(5) 常溫下，青霉素 V 鉀飽和水溶液效價大約為 75 萬 u/ml。</p><p><b>　　-</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 方成開 周慶 盧志生，青霉素提煉新工藝研究及經(jīng)濟效益評估

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97、lin, a by-product of phenoxymethylpenicillin fermentations， Antibiotics & Chemotherapy 1957，7：497~499</p><p>　　[10] 馮芳，藥物分析，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2003</p><p>　　[11] 安登魁，藥物分析，濟南：濟南出版社，1994，1575~1602<

98、/p><p>　　[12] 俞文和，新編抗生素工藝學(xué)，北京：中國建材工業(yè)出版社，1996，197~205</p><p>　　[13] 國家藥典委員會，中華人民共和國藥典(二部)，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000，1287~1288</p><p>　　[14] The United States Pharmacopoeias XXIV，Washington DC：The

99、 Board of Trustees，2000，1287~1288</p><p>　　[15] 青霉素萃取工藝條件研究，苗勇 亓平言 蘇玉山，清華大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 1999，39(10)：77~80</p><p>　　[16] 方成開 周慶 盧志生，青霉素提煉新工藝研究及經(jīng)濟效益評估(下)，濕法冶金，2001，20（3）：127~132</p><p>

100、　　[17] 譚顯東 張成剛 常志東等，青霉素萃取分離技術(shù)研究進(jìn)展，中國抗生素雜志，2005,30(6): 380~385</p><p>　　[18] 申淑鋒 常志東 孫興華等，液-液-液三相萃取苯氧甲基青霉素的研究，中國抗生素雜志，2005， 30 （8）：462~465</p><p>　　[19] 譚顯東 常志東 梁向峰，液-液-液三相萃取研究進(jìn)展及其在生化分離中的應(yīng)用，化工進(jìn)展，

101、 2003，22 (3)：244~249</p><p>　　[20] Allanson E．FAmundowicz J M，Non-extractive Penicillin V Recovery Process,US 4354971，1981-6-22</p><p><b>　　致 謝</b></p><p>　　在論文定稿之際，心中頗多

102、感慨。論文的寫作過程是艱苦的，但我有幸得到了各位師、領(lǐng)導(dǎo)、同學(xué)、朋友、同事和親人的教誨和幫助。沒有他們，也就沒有論文的最終成果。</p><p>　　首先我要特別感謝我的指導(dǎo)老師關(guān)樹文，本文是在老師的悉心指導(dǎo)下完成的。從本文的選題、構(gòu)思、寫作、修改直到最后定稿，都凝聚著導(dǎo)師的智慧、才華與心血。張老師學(xué)識淵博、治學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)求實、看待問題高屋建瓴、對待工作非常負(fù)責(zé)，為人隨和坦誠，他的言傳身教將使我終生受益。師恩難忘，在此

103、，向張老師表達(dá)我最誠摯的敬意與謝意！同時我還要感謝長春工業(yè)大學(xué)人文信息學(xué)院的很多老師。從我入學(xué)至今，他們在有形無形中、有意無意中給予我很多知識，給我的選題、論證、預(yù)答辯提供了諸多的啟發(fā)與幫助。在此向這些老師以及給予我?guī)椭钠渌蠋煴硎菊\摯的感謝。我還要感謝我的同窗同學(xué)，他們在論文寫作過程中給予了我很多的幫助。</p><p>　　最后我還要感謝我的家人，感謝他們給予我生活和精神上的關(guān)心、支持和鼓勵，才能毫無后顧之