茶樹生長素轉(zhuǎn)運載體基因家族的克隆及在越冬芽不同休眠階段的表達分析.pdf

1、芽休眠廣義上是指植物芽可見生長的暫時停止，它是植物經(jīng)長期自然演化而獲得的一種對環(huán)境條件及季節(jié)性變化有益的生物學(xué)適應(yīng)性，能夠使植物在逆境脅迫下存活，當(dāng)外界環(huán)境或內(nèi)生條件改變時，植物會重新恢復(fù)生長。茶樹（Camellia sinensis(L.)O.Kuntze）作為一種重要的經(jīng)濟作物，在茶葉生產(chǎn)上，素有“早采三天是寶，遲采三天是草”的說法。所以，培育萌發(fā)時間早的茶樹品種，可以大大提高茶葉生產(chǎn)的經(jīng)濟效益。茶樹芽休眠受諸多因素的影響，其中內(nèi)源

2、激素生長素是一個重要因素，生長素通過生長素運輸載體蛋白在植物組織或器官中建立生長素的不對稱分布，進而在植物生長發(fā)育過程中表現(xiàn)出廣泛的生理效應(yīng)。因此研究茶樹生長素運輸載體基因家族與茶樹芽休眠和解除的關(guān)系，對茶樹種質(zhì)資源早生品種的篩選鑒定，有著重要的理論和實踐意義。
　　本研究從實驗室前期茶樹冷馴化轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果中篩選拼接得到茶樹生長素轉(zhuǎn)運載體基因家族EST片段，通過5′-和3′-RACE-PCR結(jié)合RT-PCR從茶樹中克隆了生長素轉(zhuǎn)

3、運載體基因家族cDNA全長序列6條，并通過實時熒光定量PCR技術(shù)研究了其在自然休眠下的表達變化情況，為分析茶樹生長素轉(zhuǎn)運載體基因與茶樹越冬芽休眠和解除的關(guān)系提供參考。
　　（1）利用5′-和3′-RACE-PCR結(jié)合RT-PCR技術(shù)成功從茶樹中克隆了生長素轉(zhuǎn)運載體基因家族cDNA全長序列6條，并以全部提交到NCBI數(shù)據(jù)庫。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，克隆得到的6條全長序列分屬于三個亞家族，分別命名為CsPIN3、CsAUX1、CsLA

4、X1、CsLAX3、CsPILS2、CsPILS7。氨基酸序列分析顯示其含有多個跨膜螺旋，且均屬于典型的膜蛋白，這與其作為生長素轉(zhuǎn)運載體的功能相適應(yīng)。
　?。?）利用實時熒光定量 PCR技術(shù)研究了不同組織部位茶樹生長素轉(zhuǎn)運載體基因的表達情況，結(jié)果表明克隆得到的生長素轉(zhuǎn)運載體基因在茶樹根、莖、葉、花、芽中均有表達，但具有明顯的組織表達差異性。
　?。?）利用實時熒光定量 PCR技術(shù)研究了茶樹生長素轉(zhuǎn)運載體基因在茶樹越冬芽休眠開