茶樹生長(zhǎng)素轉(zhuǎn)運(yùn)載體基因家族的克隆及在越冬芽不同休眠階段的表達(dá)分析.pdf

1、芽休眠廣義上是指植物芽可見生長(zhǎng)的暫時(shí)停止，它是植物經(jīng)長(zhǎng)期自然演化而獲得的一種對(duì)環(huán)境條件及季節(jié)性變化有益的生物學(xué)適應(yīng)性，能夠使植物在逆境脅迫下存活，當(dāng)外界環(huán)境或內(nèi)生條件改變時(shí)，植物會(huì)重新恢復(fù)生長(zhǎng)。茶樹（Camellia sinensis(L.)O.Kuntze）作為一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，在茶葉生產(chǎn)上，素有“早采三天是寶，遲采三天是草”的說(shuō)法。所以，培育萌發(fā)時(shí)間早的茶樹品種，可以大大提高茶葉生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益。茶樹芽休眠受諸多因素的影響，其中內(nèi)源

2、激素生長(zhǎng)素是一個(gè)重要因素，生長(zhǎng)素通過(guò)生長(zhǎng)素運(yùn)輸載體蛋白在植物組織或器官中建立生長(zhǎng)素的不對(duì)稱分布，進(jìn)而在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中表現(xiàn)出廣泛的生理效應(yīng)。因此研究茶樹生長(zhǎng)素運(yùn)輸載體基因家族與茶樹芽休眠和解除的關(guān)系，對(duì)茶樹種質(zhì)資源早生品種的篩選鑒定，有著重要的理論和實(shí)踐意義。
　　本研究從實(shí)驗(yàn)室前期茶樹冷馴化轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果中篩選拼接得到茶樹生長(zhǎng)素轉(zhuǎn)運(yùn)載體基因家族EST片段，通過(guò)5′-和3′-RACE-PCR結(jié)合RT-PCR從茶樹中克隆了生長(zhǎng)素轉(zhuǎn)

3、運(yùn)載體基因家族cDNA全長(zhǎng)序列6條，并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究了其在自然休眠下的表達(dá)變化情況，為分析茶樹生長(zhǎng)素轉(zhuǎn)運(yùn)載體基因與茶樹越冬芽休眠和解除的關(guān)系提供參考。
　?。?）利用5′-和3′-RACE-PCR結(jié)合RT-PCR技術(shù)成功從茶樹中克隆了生長(zhǎng)素轉(zhuǎn)運(yùn)載體基因家族cDNA全長(zhǎng)序列6條，并以全部提交到NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，克隆得到的6條全長(zhǎng)序列分屬于三個(gè)亞家族，分別命名為CsPIN3、CsAUX1、CsLA

4、X1、CsLAX3、CsPILS2、CsPILS7。氨基酸序列分析顯示其含有多個(gè)跨膜螺旋，且均屬于典型的膜蛋白，這與其作為生長(zhǎng)素轉(zhuǎn)運(yùn)載體的功能相適應(yīng)。
　?。?）利用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)研究了不同組織部位茶樹生長(zhǎng)素轉(zhuǎn)運(yùn)載體基因的表達(dá)情況，結(jié)果表明克隆得到的生長(zhǎng)素轉(zhuǎn)運(yùn)載體基因在茶樹根、莖、葉、花、芽中均有表達(dá)，但具有明顯的組織表達(dá)差異性。
　?。?）利用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)研究了茶樹生長(zhǎng)素轉(zhuǎn)運(yùn)載體基因在茶樹越冬芽休眠開