葡萄ACS家族基因的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、在植物的生長發(fā)育過程中會遭受各種生物或非生物的逆境因子侵襲，如：干旱、O3、SO2、低溫、高鹽及病原菌等。上述逆境因素嚴(yán)重影響植物的生長，會導(dǎo)致作物經(jīng)濟(jì)效益的降低(作物產(chǎn)量、品質(zhì)降低或花期縮短等)。隨著可耕種土地面積急劇減少、臭氧層破壞、酸雨和全球氣溫變暖等影響，作為世界上重要的經(jīng)濟(jì)和園藝作物-葡萄，其栽培面臨著巨大的挑戰(zhàn)。大部分葡萄栽培品種易被病毒、細(xì)菌和真菌感染，抵抗和耐受各種不良環(huán)境的能力較差，因此培育葡萄抗逆新品種已經(jīng)成為解決上

2、述問題的有效途徑之一。
　　 1.氨基環(huán)丙烷-1-羧酸合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase，ACS)作為乙烯合成過程中關(guān)鍵的限速酶，能夠催化S-腺苷蛋氨酸(S-adenosylmethionine，SAM)轉(zhuǎn)化為乙烯直接前體1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid，ACC)。而乙烯在種子萌發(fā)、葉片和花的脫落

3、、果實(shí)成熟、細(xì)胞延長、創(chuàng)傷和病原菌侵染響應(yīng)等從植物種子萌發(fā)到果實(shí)成熟直至植株衰老的一系列生命過程中都起到重要的作用。所以對ACS基因及其編碼的ACS的研究具有深遠(yuǎn)的意義。
　　 本實(shí)驗(yàn)利用NCBI等數(shù)據(jù)庫搜索得到的8個VvACS基因翻譯后的氨基酸序列，進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域分析。結(jié)果表明：該8個VvACS基因均具有AAT-like保守結(jié)構(gòu)域。將這8個VvACS基因與已確定的番茄的9個ACS基因和擬南芥的11個ACS基因進(jìn)行比對，并建立系

4、統(tǒng)發(fā)生樹。結(jié)果顯示：這8個VvACS基因與已確定的番茄的9個ACS基因和擬南芥的11個ACS基因具有不同程度的相似性，為進(jìn)一步定性研究VvACS基因奠定了基礎(chǔ)。磷酸化分析顯示：上述8個VvACS均在絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸處有多處磷酸化修飾位點(diǎn)，多處磷酸化修飾位點(diǎn)的存在也說明了VvACS在翻譯后修飾階段易被磷酸化，完成折疊形成有效的三維構(gòu)象，運(yùn)輸?shù)教囟ú课话l(fā)揮其作用；利用改良SDS法提取葡萄總RNA，并利用上述VvACS基因核苷酸序列進(jìn)行