小菜蛾神經(jīng)細胞的培養(yǎng)及其對不同藥劑的響應(yīng).pdf

1、小菜蛾抗藥性問題的日趨突出和嚴重,引起了人們的廣泛重視和研究。大量研究表明,許多殺蟲劑都作用于昆蟲的神經(jīng)系統(tǒng),通過神經(jīng)細胞上的不同靶標(biāo)如乙酰膽堿受體,神經(jīng)膜上的鈉通道等來起作用。但神經(jīng)細胞由于其自身的特性,體外培養(yǎng)不易形成株系,因此,小菜蛾神經(jīng)細胞的培養(yǎng)方法的建立有其必要性。在體外嚴格控制條件下進行抗藥性機制的研究,具有簡便快捷等優(yōu)點,同時也便于在細胞水平和分子水平上研究小菜蛾的抗藥性及其機理。本研究旨在探索出一套最適合小菜蛾神經(jīng)細胞體

2、外培養(yǎng)的方法和步驟,對培養(yǎng)出的細胞進行鑒定、傳代并試圖建立三個品系(敏感、抗氟蟲腈與抗毒死蜱)小菜蛾細胞系,并進一步在細胞水平上驗證小菜蛾的抗藥性,為小菜蛾的抗藥性機制研究以及生物測定提供一個快速、可嚴格控制的系統(tǒng)。具體研究內(nèi)容如下:
　　 (1)篩選出Schneidcr's Drosophila Medium培養(yǎng)液作為培養(yǎng)小菜蛾神經(jīng)細胞的專用培養(yǎng)液,利用組織塊培養(yǎng)法和酶消化法進行小菜蛾細胞培養(yǎng),結(jié)果顯示,組織塊培養(yǎng)法更容易培養(yǎng)

3、出小菜蛾細胞,在培養(yǎng)溫度為26.0±1.0℃,所配制的去鈣鎂緩沖液pH值為6.4的條件下,成功地進行了三個品系小菜蛾腦組織神經(jīng)細胞的原代培養(yǎng)。
　　 (2)同樣采用組織塊培養(yǎng)方法,對不同品系小菜蛾的胚胎細胞進行體外培養(yǎng),成功培養(yǎng)出了原代細胞。并且對已經(jīng)長滿細胞瓶的胚胎原代細胞進行了傳代,傳代是以一比二的方法進行的,目前己傳至第三代,且生長狀況良好,有可能建立穩(wěn)定的小菜蛾胚胎細胞系。對傳代細胞進行染色體顯色,符合鱗翅目染色體的特征

4、。
　　 (3)定期觀察和拍照記錄培養(yǎng)的組織細胞,隨機選擇視野,測量神經(jīng)突起的長度,比較三個品系腦組織的神經(jīng)細胞的生長情況,試驗結(jié)果表明抗性品系小菜蛾的神經(jīng)細胞生長速度比敏感品系小菜蛾神經(jīng)細胞快,突起的長度明顯比同時期的敏感品系長。
　　 (4)進行了三個品系腦組織原代培養(yǎng)神經(jīng)細胞的藥劑試驗(藥劑為氟蟲腈和毒死蜱),探討了抗性品系(抗氟蟲腈、抗毒死蜱)神經(jīng)細胞對藥劑的反應(yīng),通過觀察和測定比較神經(jīng)突起的長度,發(fā)現(xiàn)小菜蛾抗性