菜心黑芥子酶基因的RNA干擾及其對小菜蛾的影響.pdf

1、硫代葡萄糖苷-黑芥子酶系統(tǒng)是十字花科植物自我防御的一個重要系統(tǒng)，被稱為“芥子油炸彈”。當(dāng)植物受到病蟲侵害時，黑芥子酶被釋放出來，降解硫代葡萄糖苷生成許多具有生物活性的物質(zhì)。本研究利用黑芥子酶基因被RNA干擾的轉(zhuǎn)基因菜心植株，探討黑芥子酶基因在菜心(Brassica campestris L.ssp.chinensis var.utilis Tsen et Lee)與小菜蛾(Plutella xylostella)的相互關(guān)系中的作用。首先

2、對菜心再生體系進(jìn)行了研究，獲得了菜心在MS培養(yǎng)基中添加6-BA5 mg/L、NAA0.2 mg/L、AgNO34 mg/L的情況下對菜心再生分化最有利；同時利用本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建的黑芥子酶基因的RNA干擾表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化菜心，獲得了16塊抗性愈傷組織，5株抗性苗，經(jīng)分子檢測，確認(rèn)5株抗性苗均為轉(zhuǎn)基因植株，并對5株轉(zhuǎn)基因植株的RNA干擾效果進(jìn)行了RT-PCR檢測，發(fā)現(xiàn)5株轉(zhuǎn)基因植株中黑芥子酶基因表達(dá)的mRNA均受到了顯著的抑

3、制。其次，對正常菜心與轉(zhuǎn)基因菜心及其在小菜蛾為害后的揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行了收集分析，發(fā)現(xiàn)正常菜心及其蟲害后的揮發(fā)性物質(zhì)中烷烴類和醇類物質(zhì)較多，轉(zhuǎn)基因菜心及其蟲害后的揮發(fā)性物質(zhì)中萜烯類、芳香及雜環(huán)化合物較多。最后，分別用正常菜心與轉(zhuǎn)基因菜心喂養(yǎng)小菜蛾，發(fā)現(xiàn)寄主為正常菜心的小菜蛾在幼蟲體重、蛹重較以轉(zhuǎn)基因菜心為寄主的小菜蛾要重，且以正常菜心喂養(yǎng)的小菜蛾單雌的產(chǎn)卵量也較多，而幼蟲期卻較短。因此，認(rèn)為黑芥子酶基因表達(dá)量高的正常菜心更能吸引小菜蛾取食及