暗紋東方鲀種群遺傳多樣性研究.pdf

1、暗紋東方鲀（Takifugu obscurus）俗稱河鲀，屬硬骨魚綱(Osteichthyes)鲀形目(Tetraodontiformes)鲀科(Tetraodontidae)東方鲀屬(Fugu)，是一種重要的洄游性魚類。因其肉質(zhì)細嫩，肉味腴美，營養(yǎng)豐富，享有“長江三鮮之一”的美譽。暗紋東方鲀是長江中一種具有重要經(jīng)濟價值的漁業(yè)資源，近年來，由于水環(huán)境污染和過度捕撈等原因，暗紋東方鲀資源急劇下降，目前已不能形成漁汛，這必然會給暗紋東方鲀種

2、質(zhì)資源產(chǎn)生不利的影響。本文采用了微衛(wèi)星和序列相關(guān)擴增多態(tài)性兩種分子標記，研究了1個暗紋東方鲀長江捕撈群體、1個放流群體和2個養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性狀況及其遺傳結(jié)構(gòu)。論文主要研究結(jié)果如下:
　　 1.研究了紅鰭東方鲀微衛(wèi)星標記對暗紋東方鲀的適用性。利用16對紅鰭東方鲀微衛(wèi)星引物對暗紋東方鲀基因組DNA進行PCR擴增，并優(yōu)化PCR條件，結(jié)果表明10對微衛(wèi)星引物（占總數(shù)62.5％）能擴增出特異性條帶，且都表現(xiàn)出多態(tài)性，可用于暗紋東方鲀?nèi)?/p>

3、體遺傳多樣性分析。
　　 2.選用10對暗紋東方鲀和10對經(jīng)篩選的紅鰭東方鲀微衛(wèi)星引物，對4個暗紋東方鲀?nèi)后w（1個長江捕撈江群體，1個放流群體和2個養(yǎng)殖群體）進行了遺傳多樣性分析。結(jié)果顯示，20對微衛(wèi)星引物在4個群體中共擴增得到113個等位基因，等位基因數(shù)在2-10之間，平均每個位點得到5.65個等位基因。各個群體的平均等位基因數(shù)（A）為4.95-5.50，平均觀測雜合度（Ho）為0.6867-0.7617、平均期望雜合度（He

4、）為0.6530-0.7000、平均多態(tài)信息含（PIC）0.6013-0.6384。群體間遺傳分化系數(shù)(Fst)為0.0406，基因流(Nm)值為5.9056，表明4個群體遺傳分化程度微弱，存在一定程度的基因交流。4個群體間的遺傳距離為0.0880-0.1519，采用UPGMA法對4個群體進行聚類分析，結(jié)果表明上海養(yǎng)殖群體單獨聚為一類，其余3個群體聚為另一類。
　　 3.利用正交設(shè)計L16(45)對影響暗紋東方鲀SRAP-PCR

5、反應(yīng)的5個因素（Mg2+、Taq酶、dNTPs、模板DNA、引物）在4個水平上進行正交組合，確立了暗紋東方鲀SRAP反應(yīng)最佳體系:20μL的PCR體系中含有Mg2+1.5mmol/L、Taq酶0.5 U、模板DNA75 ng、dNTPs0.15 mmol/L、引物0.2μmol/L。利用30個暗紋東方鲀樣本對該體系進行驗證，結(jié)果表明該體系穩(wěn)定可靠。
　　 4.利用上述反應(yīng)體系，從49對引物組合中篩選出18對擴增條帶清晰、穩(wěn)定的引

6、物組合首次對4個暗紋東方鲀?nèi)后w進行了遺傳多樣性分析。共獲得231個位點，其中多態(tài)位點數(shù)為156個，占總位點數(shù)百分比為67.53％。4個群體內(nèi)多態(tài)位點比例為54.98％-58.87％，群體的Nei's基因多樣性指數(shù)(H)為0.1992-0.2005，群體Shannon多樣性指數(shù)(I)為0.2953-0.3016，群體間基因流(Nm)為4.1291。長江捕撈群體的多態(tài)位點比例、基因多樣性指數(shù)、Shannon多樣性指數(shù)均略高于其它三個群體。采