蠟蚧轉(zhuǎn)枝菌(Verticillum lecanii)對柑橘粉虱子(Diaelorude citri)基因表達的影響.pdf

1、柑橘粉虱(Diaelorude citri Asahmaed)分布廣，寄主多，食性雜，可危害柑橘及桃、柿、苦楝等30余種植物，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。由于若蟲和蛹表面有蠟質(zhì)保護，且該蟲一年發(fā)生多代、易對殺蟲劑產(chǎn)生抗性，所以具有一定的防治難度。蠟蚧輪枝菌（Verticillium lecanii）分布廣，防效好，寄生率高，是防治柑橘粉虱的有效蟲生真菌。目前關(guān)于柑橘粉虱免疫機制方面的報道很少，為了從分子水平上闡明柑橘粉虱防御蠟蚧輪枝菌的分子免疫

2、機理，我們應(yīng)用高通量測序技術(shù)(Illumina HiSeqTM2000)測定了柑橘粉虱轉(zhuǎn)錄組，在此基礎(chǔ)上，運用數(shù)字基因表達譜技術(shù)比較了蠟蚧輪枝菌處理組及敏感組間基因表達差異。本研究主要結(jié)論如下:
　　1、蠟蚧輪枝菌培養(yǎng)基篩選
　　通過以生長速率和產(chǎn)孢量為指標(biāo)，篩選出適宜蠟蚧輪枝菌生長的培養(yǎng)組分及其配比。當(dāng)培養(yǎng)組分為:12％乳糖、0.05％胰蛋白胨、0.03％ FeSO4·7H2O、0.01％VB1時，蠟蚧輪枝菌菌落長勢最好。

3、而當(dāng)培養(yǎng)組分為2％乳糖、0.4％胰蛋白胨、0.03％ FeSO4·7H2O、0.01％ VB1時，蠟蚧輪枝菌產(chǎn)孢速度最快。
　　2、柑橘粉虱轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)組裝
　　通過高通量Illumina測序，獲得柑橘粉虱reads24，071，734條，通過序列之間的overlap信息組裝得到2，318，371條平均長度為82bp的contig，運用成對的reads對以上組裝的contig進行拼接和填補，得到119，428條平均長度為952

4、bp的transcripts。進一步組裝transcripts后，獲得平均長度為772bp的unigene84，733條。
　　3、柑橘粉虱轉(zhuǎn)錄組信息學(xué)分析
　　將Unigene比對到nr、GO、COG、KEGG和swissprot等數(shù)據(jù)庫中，共有28，190條基因獲得功能注釋，其中獲得GO功能注釋的Unigene有17，081條，獲得COG成功注釋的Unigene11，516條，9，387條Unigene得到KEGG的功能

5、注釋，獲得nr功能注釋的有27，746條。
　　4、柑橘粉虱免疫相關(guān)基因分析
　　從組裝的Unigene中鑒定出與柑橘粉虱免疫防御相關(guān)的基因210條Unigene，包括(1)模式識別受體:清道夫受體基因8條，乳糖凝集素基因5條，C類凝集素3條，肽聚糖識別受體及革蘭氏陰性菌結(jié)合蛋白基因各1條;(2)信號傳導(dǎo)因子:絲氨酸蛋白酶基因46條，絲氨酸蛋白酶抑制因子基因16條，Toll受體基因20條;(3)效應(yīng)因子:含硫脂蛋白基因26條

6、，酚氧化酶原基因18條，溶菌酶和抗菌肽基因各3條;(4)其他因子:過氧化氫酶基因17條，酯酶基因15條，過氧化物酶基因11條，超氧化物歧化酶基因9條，半胱天冬酶基因2條。
　　5、蠟蚧輪枝菌侵染柑橘粉虱的差異表達基因分析
　　分析蠟蚧輪枝菌侵染前后柑橘粉虱的數(shù)字基因表達譜發(fā)現(xiàn)，與對照相比，1天組和7天組分別獲得差異倍數(shù)大于1且FDR小于0.001的差異表達基因213條、676條。1天組和7天組中同時得到GO和pathway顯