黃瓜根莖鐮孢菌的分離鑒定及遺傳多樣性分析.pdf

1、黃瓜枯萎病是由半知菌亞門鐮孢菌（Fusarium spp.）侵染引起的一種土傳病害，是影響黃瓜生產(chǎn)的最主要病害之一。由于保護(hù)地的特殊環(huán)境條件和長(zhǎng)期連作，土壤中病原菌量的積累越來越多，致使黃瓜枯萎病等土傳病害發(fā)生逐年加重。本研究通過對(duì)中國(guó)8個(gè)地區(qū)黃瓜根莖鐮孢菌進(jìn)行分離、鑒定及多樣性研究，旨在明確中國(guó)8個(gè)不同省市黃瓜枯萎病的主要致病菌及其遺傳多樣性，為黃瓜枯萎病的科學(xué)診斷、生理分化及抗病育種奠定基礎(chǔ)。
　　 1.對(duì)采集自哈爾濱、長(zhǎng)春

2、、沈陽(yáng)、北京、保定、銀川、西寧及杭州8個(gè)城市的478株鐮孢菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定，確定它們屬于7種鐮孢菌，分別為尖孢鐮孢菌（Fusarium oxysporum），銳頂鐮孢菌（Fusarium acuminatum），木賊鐮孢菌（Fusarium equiseti），腐皮鐮孢菌（Fusarium solani），半裸鐮孢菌（Fusarium semitectum），輪枝鐮孢菌（Fusariumverticillioides）和層出

3、鐮孢菌（Fusarium proliferatum）。其中尖孢鐮孢菌占77.62％，銳頂鐮孢菌占0.21％，木賊鐮孢菌占3.97％，腐皮鐮孢菌占15.48％，半裸鐮孢菌占1.46％，輪枝鐮孢菌占0.84％，層出鐮孢菌占0.42％。
　　 2.對(duì)分離得到的478株鐮孢菌進(jìn)行致病性測(cè)定結(jié)果表明，尖孢鐮孢菌（Fusariumoxysporum）為哈爾濱、長(zhǎng)春、沈陽(yáng)、北京、保定、銀川、西寧和杭州地區(qū)黃瓜枯萎病的主要致病菌。雖然在上述地區(qū)

4、的黃瓜枯萎病株上同時(shí)分離到腐皮、木賊、銳頂、半裸、層出和輪枝鐮孢菌，但接種后各菌株均未見侵染癥狀，屬非致病菌。
　　 3.通過對(duì)478株鐮孢菌菌株生長(zhǎng)速率與致病力進(jìn)行相關(guān)性分析得知，菌株生長(zhǎng)速率與病情指數(shù)之間相關(guān)性顯著，這也表明菌株的生長(zhǎng)速率快致病力相應(yīng)就高，致病力的高低與生長(zhǎng)速率快慢有關(guān)。
　　 4.應(yīng)用AFLP分子標(biāo)記檢測(cè)了中國(guó)8個(gè)城市黃瓜枯萎病菌的遺傳多樣性及不同地區(qū)菌株間的親緣關(guān)系。在130對(duì)引物組合中，篩選出1

5、6對(duì)多態(tài)性好、帶型清晰的引物組合。利用這16對(duì)引物組合對(duì)371株尖孢鐮孢菌進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，共擴(kuò)增出123082條帶，其中多態(tài)性標(biāo)記53463條，占43.44％。利用NTSYSpc軟件中UPGMA算法構(gòu)建了黃瓜枯萎病菌的親緣關(guān)系樹狀圖，聚類分析結(jié)果表明中國(guó)黃瓜枯萎病菌的遺傳多樣性與病原菌的地理來源有一定的相關(guān)性，同時(shí)中國(guó)黃瓜枯萎病菌遺傳分化較大，不同地區(qū)群體遺傳多樣性比較豐富。
　　 5.利用篩選出的引物組合E14/M11對(duì)尖孢