黃瓜綠斑駁花葉病毒遺傳多樣性分析及侵染性克隆的構(gòu)建.pdf

1、黃瓜綠斑駁花葉病毒（Cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV）主要侵染黃瓜、西瓜、甜瓜、葫蘆等葫蘆科作物，造成嚴(yán)重的病害，并在許多國家造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。CGMMV為我國的檢疫對象，在我國部分地區(qū)都已檢測到。明確CGMMV的侵染來源和致病機(jī)理對于有效控制該病毒的危害具有重要的作用。本研究測定了山東濟(jì)南和青島 CGMMV分離物的全基因組序列，根據(jù)系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果明確了其來源，成功構(gòu)建了CGMMV的侵

2、染性克隆。主要結(jié)果如下：
　?。?）獲得了山東濟(jì)南和青島兩個(gè)CGMMV分離物（CGMMV-JN和CGMMV-QD）的全長基因組序列。序列測定結(jié)果表明，CGMMV-JN和CGMMV-QD基因組全長均為6424核苷酸（nt），5′和3′-UTR分別含有60和176 nt，共有4個(gè)開放閱讀框（ORF），分別編碼129 kDa和186 kDa復(fù)制酶相關(guān)蛋白、29 kDa移動蛋白及17.4 kDa外殼蛋白。
　?。?）多重序列比對結(jié)果

3、顯示CGMMV-JN與另外CGMMV分離物全基因組核苷酸序列一致率為90.0％~99.7%。重組分析發(fā)現(xiàn)韓國 KOM（AF417243）、以色列 EC（KF155231）、印度（DQ767631）和我國河北的CHB（KJ658958）4個(gè)分離物在RdRp編碼區(qū)存在重組事件，CGMMV-JN和CGMMV-QD不存在重組事件。選擇壓力分析結(jié)果表明rdrp、mp基因處于負(fù)選擇，cp基因處于正選擇。
　?。?）構(gòu)建了基于全基因組序列的系統(tǒng)

4、進(jìn)化樹，CGMMV分離物分為3個(gè)組，CGMMV-JN和CGMMV-QD都屬于I組，其中CGMMV-JN與我國遼寧、臺灣及日本分離物較近，CGMMV-QD與我國山東、江蘇及韓國分離物較近，根據(jù)所用種子來源及系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果推測CGMMV-JN和CGMMV-QD可能分別來源于日本和韓國。
　　（4）構(gòu)建了可以通過農(nóng)桿菌浸潤接種的CGMMV侵染性 cDNA克隆。通過融合PCR在 RdRp基因內(nèi)部插入西瓜內(nèi)含子，將 CGMMV-JN基因組