竹黃及其分離真菌的遺傳多樣性分析.pdf

1、竹黃(Shiraia bambusicola P.Henn.)是我國(guó)一種稀有的寄生性藥用真菌,具有極大的藥用價(jià)值,隨著竹黃中具有光敏活性的竹紅菌素(竹紅菌甲素和竹紅菌乙素)的發(fā)現(xiàn),竹黃的應(yīng)用研究日益受到重視。
　　 為了了解竹黃地理居群間的遺傳分化,采用ISSR分子標(biāo)記對(duì)江蘇、安徽和浙江3省的8個(gè)居群共107個(gè)竹黃樣本進(jìn)行了遺傳多樣性的分析。本研究首先探討了Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物和模板DNA等5個(gè)因素對(duì)

2、ISSR-PCR擴(kuò)增的影響,通過(guò)單因子試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)方法相結(jié)合建立并優(yōu)化了竹黃ISSR-PCR反應(yīng)體系。采用優(yōu)化好的體系,對(duì)來(lái)自江蘇、安徽、浙江三省的8個(gè)自然居群共107個(gè)竹黃樣本進(jìn)行遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)的分析。結(jié)果表明,篩選得到的11條引物共檢測(cè)出241個(gè)位點(diǎn),其中多態(tài)性位點(diǎn)240個(gè),占99.59％,居群水平的多態(tài)位點(diǎn)百分率平均為64.21％,其中以浙江天目山為最高(74.27％),江蘇宜興為最低(45.23％)。Nei’s基因多樣性

3、指數(shù)、Shannon多態(tài)性信息指數(shù)分別為0.3314和0.4996,表明竹黃的遺傳多樣性較高。居群Nei’s基因分化系數(shù)Gst為0.3314,居群內(nèi)產(chǎn)生了較大的遺傳分化。AMOVA分析表明,居群間變異占39.96％,居群內(nèi)變異占60.04％,遺傳變異主要存在于居群內(nèi)。8個(gè)居群間的遺傳距離變化范圍在0.1115～&2453之間,平均為0.1766。居群間的基因流Nm=1.0086,說(shuō)明居群間存在一定的基因交流。UPGMA聚類分析以及主坐標(biāo)

4、分析結(jié)果顯示,地理上距離較近的居群多聚在一起,表現(xiàn)出一定的地域性,說(shuō)明各居群的親緣關(guān)系與地理分布有著密切關(guān)系。
　　 為了鑒定竹黃子實(shí)體的相關(guān)菌,本研究從江蘇宜興、安徽廣德以及浙江的安吉和麗水采集的竹黃子實(shí)體上分離純化得到了36株真菌,對(duì)它們進(jìn)行ITS-rDNA序列的系統(tǒng)學(xué)分析,利用鄰接法和最大簡(jiǎn)約法分別對(duì)這36株菌的ITS序列和其它15條來(lái)自GenBank的相關(guān)序列進(jìn)行了分析,結(jié)果表明這些真菌中29株屬于子囊菌,3株屬于擔(dān)子菌