福建省枳椇種質(zhì)資源遺傳多樣性的RAPD和ISSR分子標(biāo)記分析.pdf

1、枳椇(Hovenia acerba)是一種珍貴的經(jīng)濟(jì)樹種，它集材、果、藥、觀賞于一身，生長快，適應(yīng)性強(qiáng)，極具開發(fā)價(jià)值。枳椇種質(zhì)資源的遺傳多樣性研究是開發(fā)利用枳椇資源中一個(gè)不可或缺的重要環(huán)節(jié)。 本研究利用RAPD和ISSR兩種分子標(biāo)記方法，對福建省12個(gè)種源地35份枳椇材料進(jìn)行遺傳多樣性研究，分析這些種質(zhì)資源之間的親緣關(guān)系，旨在為開發(fā)利用枳椇資源、篩選優(yōu)良種源、雜交育種等工作提供一定的理論依據(jù)。本文研究結(jié)果如下： (1)建

2、立并優(yōu)化了適合于枳椇遺傳多樣性分析的RAPD和ISSR反應(yīng)體系。確立了RAPD最佳反應(yīng)體系為：反應(yīng)總體積25μl，10×Ex Taq Buffer(Mg2+ plus)2.5μl，dNTP Mixture200μmol/L，引物0.5μmol/L，DNA模板25ng，Ex Taq酶1.5U，ddH2O17.95μl。程序：預(yù)變性94℃5min，變性94℃1min，退火36℃1min，延伸72℃2min，45個(gè)循環(huán)，最后延伸72℃10mi

3、n。確立了ISSR最佳反應(yīng)體系為：反應(yīng)總體積25μl，10×Ex Taq Buffer(Mg2+ plus)2.5μl，dNTP Mixture375μmol/L，引物0.4μmol/L，DNA模板75ng，Ex Taq酶1U，ddH2O14.55μl。程序：預(yù)變性94℃5min，變性94℃30s，退火50℃1min，延伸72℃90s，共35個(gè)循環(huán)，最后延伸72℃7min。 (2)分別從50個(gè)RAPD隨機(jī)引物和50個(gè)ISSR引物

4、中各篩選出10個(gè)擴(kuò)增強(qiáng)、重復(fù)性好、帶型清晰的引物進(jìn)行擴(kuò)增。10個(gè)RAPD引物共檢測了基因組DNA中193個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)有161個(gè)，占擴(kuò)增總位點(diǎn)數(shù)的83.42％。每個(gè)引物擴(kuò)增的位點(diǎn)數(shù)一般在13.27個(gè)之間，平均為19.3個(gè)。10條引物在35個(gè)材料中共擴(kuò)增出3956條條帶，每個(gè)引物在每個(gè)各材料中的擴(kuò)增的條帶數(shù)一般在3-19條，平均為11.3條。10個(gè)ISSR引物共檢測了基因組DNA中175個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)有155個(gè)，占擴(kuò)增總位

5、點(diǎn)數(shù)的88.57％，比RAPD高出了四個(gè)百分點(diǎn)。每個(gè)引物擴(kuò)增的位點(diǎn)數(shù)一般在15-23個(gè)之間，平均為17.5個(gè)。10個(gè)引物在35個(gè)材料中共擴(kuò)增出2910條條帶，每個(gè)引物在每個(gè)材料中的擴(kuò)增的條帶數(shù)一般在3-15條，平均為8.3條。將任一擴(kuò)增帶看作一個(gè)性狀，按帶的有無列出二元數(shù)據(jù)矩陣，假定處于哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinberg Equilibrium)下，計(jì)算出觀測等位基因數(shù)(Na)、有效等位基因數(shù)(Ne)、Shannon多樣性指

6、數(shù)(I)、Nei’s基因多樣性(H)，群體總基因多樣性(Ht)、群體內(nèi)基因多樣性(Hs)、基因分化系數(shù)(Gst)、基因流(Nm)，Nei’s(1972)遺傳距離與遺傳相似性，并根據(jù)Nei’s(1972)遺傳距離進(jìn)行UPGMA聚類分析，構(gòu)建各材料基因型之間親緣關(guān)系樹狀圖。 分析表明，RAPD與ISSR兩種分子標(biāo)記方式都能較好地反映枳椇種質(zhì)資源的遺傳差異，揭示其遺傳多樣性。供試的福建省12個(gè)種源地35份枳椇材料存在著豐富的遺傳多樣性