辣椒種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、以7份辣椒(CapsicumannuumL.)種質(zhì)為材料，使用SDS法、CTAB法和高鹽低pH法對其葉片基因組DNA提取方法進(jìn)行了篩選。以原產(chǎn)地為湖南、四川、江西、海南、廣東、吉林等省份的52份辣椒地方資源為材料，在建立高效快速的ISSR分析技術(shù)體系的基礎(chǔ)上，對其進(jìn)行ISSR分析，以評價我國辣椒地方資源的遺傳多樣性，分析其親緣關(guān)系，為應(yīng)用地方品種資源的雜種優(yōu)勢提供依據(jù)。主要試驗結(jié)果如下： 1.使用SDS法、CTAB法和高鹽低pH

2、法對辣椒(CapsicumannuumL.)葉片基因組DNA進(jìn)行提取，經(jīng)過檢測，SDS法是辣椒基因組DNA提取的最佳方法。 2.經(jīng)過優(yōu)化，確定PCR反應(yīng)采用20μL體系，其中模板2μL；10×Buffer3μL；引物1.5μL；10mMdNTP0.15μL；taqE酶0.75μL；補ddH2O至20μL。PCR反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性5min，95℃變性30s，50℃退火30s，72℃延伸2min30s，進(jìn)行40個循環(huán)，最后72

3、℃延伸7min，4℃保存。 3.從60條ISSR引物中篩選了效果好的11條引物。 4.在52個供試材料中，11個ISSR引物共擴增出98條帶，其中多態(tài)性條帶數(shù)為89條，多態(tài)性率90.8％，其中擴增條帶最多的引物為UBC834，共擴增出16條；最少的為UBC844，僅有3條。 5.依據(jù)遺傳相似系數(shù)進(jìn)行聚類分析，在D=0.80時，所構(gòu)建的樹狀聚類圖將供試材料分為3大類，第一大類為長椒、簇生椒和圓錐椒；第二大類為燈籠椒