菜心種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、菜心(Brassica campestris L.ssp.chinensis Var．utilis Tssen.et Lee.)為十字花科(Crueiferae)蕓苔屬(Brassica L.)白菜亞種的一個(gè)變種，是我國華南地區(qū)特產(chǎn)蔬菜，栽培歷史悠久。本試驗(yàn)通過錨定簡(jiǎn)單重復(fù)序列(ISSR)分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)菜心進(jìn)行研究，試圖通過聚類分析，探討品種間的遺傳分化。主要研究結(jié)果如下： 1、菜心基因組DNA的提取根據(jù)菜心組織中含糖量高的特性

2、，用改良的CTAB法提取到適用于ISSR擴(kuò)增反應(yīng)的基因組DNA。通過紫外分光光度法檢測(cè)該法提取的DNA，其OD260與OD280的比值在1.8左右，OD260與OD230的比值在2.0左右；瓊脂糖電泳檢測(cè)也呈現(xiàn)單一、明亮的條帶。 2、ISSR反應(yīng)條件的優(yōu)化首先通過兩種方法對(duì)影響ISSR-PCR擴(kuò)增的諸多因子進(jìn)行優(yōu)化，最終建立適合菜心的ISSR反應(yīng)體系：25μl反應(yīng)體系中含2.5μl 10×buffer，0.5μmol/L pri

3、mer，0.5U Taq酶，0.24 mmol/L dNTPs，2.0 mmol/L MgCl2，30 ng模板DNA。隨后建立適合菜心ISSR-PCR的反應(yīng)參數(shù)：94℃預(yù)變性3min；94℃變性1min，53.8℃退火1min(不同引物退火溫度不同)，72℃延伸45sec，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸5min。 3、引物的篩選以10個(gè)具有代表性的栽培品種為材料，從50個(gè)引物中篩選出12個(gè)能擴(kuò)增出多態(tài)性的引物。 4、菜心遺傳多

4、樣性分析12個(gè)引物共檢測(cè)到103個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)位點(diǎn)58個(gè)，多態(tài)位點(diǎn)百分率P(％)為56.31％，平均多樣性指數(shù)(I)為0.229，遺傳相似系數(shù)(H)為0.144，觀察等位基因數(shù)(Na)和有效等位基因數(shù)(Ne)分別為1.563和1.225，遺傳距離(GD)的范圍在0.029-0.344之間，表明菜心遺傳多樣性較低。根據(jù)DNA擴(kuò)增結(jié)果，采用UPGMA聚類分析，將供試材料分為六大類群。聚類結(jié)果與傳統(tǒng)的按照菜心對(duì)溫度的反應(yīng)和栽培季節(jié)不同而進(jìn)行