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文檔簡介
1、中國水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)為石蒜科水仙屬多年生球根花卉,是法國水仙(Narcissus tazetta)的一個變種。中國是世界重要的水仙生產(chǎn)及出口國之一,久負盛名的中國水仙不僅是中國著名的十大傳統(tǒng)名花之一,更是中國傳統(tǒng)出口花卉中的佼佼者[12]。但近年來,我國在水仙生產(chǎn)中存在的品種單一、病蟲害增多,品質(zhì)下降等問題日益顯現(xiàn),因此需要進行水仙育種基礎(chǔ)性研究,為培育新品種打下堅實的基礎(chǔ)。一直以來
2、,對漳州水仙的染色體起源問題都不是很明確,而且研究大多是局限在細胞學(xué)水平,分子水平研究甚少,作者認為對漳州水仙有代表性的第7號染色體的3條隨體染色體的研究,將對探索漳州水仙的染色體起源問題及指導(dǎo)水仙新品種的選育有較大的意義。 本研究以漳州水仙為材料,探索了漳州水仙隨體染色體數(shù),通過染色體微分離、微克隆技術(shù)建立了兩條隨體染色體(第7號染色體)單染色體DNA文庫,并且把該技術(shù)與單酶切AFLP分子標記技術(shù)相結(jié)合,建立了兩條染色體分子標
3、記。主要內(nèi)容及結(jié)論如下: 1.漳州水仙的隨體染色體 漳州水仙為三倍體,2n=3x-30,其中第7號染色體的3條染色體均為隨體染色體,但3條隨體染色體形態(tài)不同。當(dāng)染色體預(yù)處理時間過長時,其中一條隨體收縮過短,光學(xué)顯微鏡下難以辨認。 2.漳州水仙隨體染色體DNA文庫的構(gòu)建 用玻璃針顯微分離出漳州水仙兩條隨體染色體,經(jīng)LA-PCR擴增得到200~2500bp的DNA片段;Southern雜交表明,擴增片段與漳州
4、水仙基因組DNA之間有同源性,從而證明漳州水仙帶隨體染色體DNA已經(jīng)被成功擴增;將擴增產(chǎn)物克隆到PMD18-T載體中,約獲得5.0×105個和3.7×105個克隆,經(jīng)EcoRⅠ、HindⅢ酶切鑒定插入片段大小為300~2000bp。 3.兩條染色體的AFLP分子標記 將LA-PCR技術(shù)與單酶切AFLP分子標記結(jié)合,以LA-PCR接頭序列為依據(jù),設(shè)計引物,通過變性聚丙烯酰胺膠電泳與銀染技術(shù),建立了兩條染色體的分子標記,并且
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