水稻微切微克隆文庫(kù)的構(gòu)建及BAC克隆的染色體定位.pdf

1、該文將染色體微切微克隆方法應(yīng)用于水稻基因組研究,結(jié)果如下:1、應(yīng)用顯微切割方法分離了水稻1號(hào)染色體,水稻4號(hào)染色體和水稻4號(hào)染色體端粒區(qū),經(jīng)連接接頭PCR(LA-PCR),使fg級(jí)DNA體外擴(kuò)增到μg級(jí),成功的構(gòu)建了水稻1號(hào)染色體,4號(hào)染色體和4號(hào)染色體端粒區(qū)特異性DNA文庫(kù).2、對(duì)水稻4號(hào)染色體BAC克隆上公布序列設(shè)計(jì)套式PCR引物,經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明,該引物在水稻4號(hào)微切染色體中能擴(kuò)增出分子量特異的單一條帶.3、以水稻4號(hào)染色體短臂RFLP

2、分子標(biāo)記FR2373公布序列設(shè)計(jì)特異性引物,采用PCR法對(duì)水稻4號(hào)染色體端粒區(qū)文庫(kù)中的500個(gè)陽(yáng)性克隆進(jìn)行篩選;以水稻1號(hào)染色體sd-1基因兩側(cè)RFLP分子標(biāo)記RG109和RZ161引物特異性擴(kuò)增產(chǎn)物為探針,采用微陣列法對(duì)水稻1號(hào)染色體微切微克隆文庫(kù)中的240個(gè)克隆子進(jìn)行篩選;未得到特異性克隆子.分析表明,由于篩選的克隆數(shù)目少和存在不定期的假陽(yáng)性,從文庫(kù)中篩選特異性片段需要進(jìn)一步擴(kuò)大篩選克隆的數(shù)目.下一步我們將采用微降列法雜交法進(jìn)行大規(guī)