壺瓶棗褐斑病的病原鑒定和防治研究.pdf

1、壺瓶棗褐斑病為近年來山西壺瓶棗發(fā)生的一種嚴(yán)重的果實病害，在田間發(fā)病初期主要在棗果的果頂或果肩部位出現(xiàn)紅色的病斑，病斑凹陷，后期變?yōu)榧t褐色，病斑的邊緣清晰，除病斑外的其他部位的果肉既不腐爛也不變色。該病嚴(yán)重發(fā)生時可使果實發(fā)病率高達50％以上，給紅棗的產(chǎn)量和品質(zhì)造成很大影響。本實驗通過分離病原菌，用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法對病菌進行了鑒定，并篩選出對病菌有抑制作用的拮抗菌和化學(xué)藥劑，為此病害的田間防治奠定了基礎(chǔ)，主要研究結(jié)果如下：
　　

2、 1.病原菌的分離和鑒定
　　 以壺瓶棗病果為材料，分離了30個棗果的150個病組織塊，分離獲得135個菌株，根據(jù)菌落特征發(fā)現(xiàn)各菌株沒有明顯差異，為同一種類型的真菌。通過室內(nèi)和田間致病性測定以及人工接種后再分離，證明編號為CN535的真菌菌株為該病的致病菌。該病菌在PDA上培養(yǎng)7 d菌落直徑達69.2～73.5 mm，基內(nèi)菌絲和氣生菌絲均發(fā)達，具明顯的淺灰與墨綠色的同心輪紋；分生孢子單生或短鏈生，具縱橫隔膜和短喙，大小為22.

3、5～40.0×8.0～13.5 μm，為典型的Alternaria屬真菌特征。在PDA和PCA培養(yǎng)基上進行產(chǎn)孢培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在細長分生孢子梗的上部形成特征性的具短分枝的孢子鏈，支鏈一般長1～5個孢子，似小樹叢狀，為A.alternata的特征。其rDNA-ITS序列分析結(jié)果表明該菌與A.alternata、A.tenuissima、A.longipes、A.mali和A.citri的同源性均為100％。用兩對鏈格孢菌的特異性引物AAF2

4、/AAR3和Aalt-F/Aalt-R分別擴增出相對應(yīng)的341 bp和450 bp的片段。綜合形態(tài)特征和分子分析結(jié)果，確定壺瓶棗褐斑病的病原菌為A.alternata(Fries)Keissler。
　　 2.內(nèi)生菌的分離和拮抗菌的室內(nèi)篩選
　　 在PDA、KB和NA三種培養(yǎng)基上分離棗果的內(nèi)生菌，純化后，根據(jù)形態(tài)將其確定為同一種菌，在KB上菌落呈黃綠色，邊緣平滑。從土壤中直接分離和篩選拮抗菌，共得到16個菌株，經(jīng)過測定這

5、些菌株對病原菌的菌絲生長均無明顯的抑制作用。從經(jīng)過高溫預(yù)處理的土壤中分離拮抗菌的比例比常溫下從土壤中分離拮抗菌的比例高，但是并不呈正比關(guān)系。同時得到4個抑菌率90.0％以上的菌株和11個抑菌率在80.0％～90.0％之間的菌株。生防細菌中CHA0r、WCS358::phl和SB對病原菌菌絲生長抑制率分別達到54.7％、51.2％和46.5％。CHA0r、ZN和WCS358::phl的抑菌圈直徑分別達到14.3 mm、12.7 mm和12

6、.7 mm，抑菌圈效果明顯。生防鏈霉菌中龜裂鏈霉菌和武夷菌素鏈霉菌對菌絲生長抑制率分別達到58.0％和67.3％，抑菌圈直徑分別達到30.0 mm和25.3 mm，抑制作用均較明顯。而菌株CN120和CN121對褐斑病菌菌絲生長不但沒有抑制作用，反而促使其菌落生長。
　　 3.化學(xué)藥劑防治壺瓶棗褐斑病
　　 選用9種常見的殺菌劑室內(nèi)測定對壺瓶棗褐斑病菌Alternaria alternata的毒力。采用生長速率抑制法和懸

7、滴法分別測定了9種殺菌劑對該病菌的菌絲生長和孢子萌發(fā)的抑制作用，并測定了其中6種殺菌劑對該病菌的毒力。同時在室內(nèi)測定了6種藥劑對病原菌的防治效果，將室內(nèi)防效好的藥劑用于田間防效測定。結(jié)果表明，異菌脲、代森錳鋅、施力科、劍斑和多菌靈對病菌菌絲生長抑制作用較強，抑菌率均達到90.0％以上；代森錳鋅、劍斑、多菌靈、炭阻絕和施力科對病菌孢子萌發(fā)抑制活性比較強，抑菌率也達到85.0％以上。毒力測定結(jié)果表明，異菌脲、炭阻絕、施力科、多菌靈、劍斑和代

8、森錳鋅的有效中濃度(EC50)分別為0.2，11.1，14.5,20.8,28.5和149.9 mg/L，其中異菌脲的有效中濃度最低，相對抑制效果最好；施力科和多菌靈次之；代森錳鋅最差。室內(nèi)防效測定，發(fā)現(xiàn)施力科、劍斑、代森錳鋅和異菌脲的防效較好，而炭阻絕和多菌靈的防效較差。6種藥劑的相關(guān)系數(shù)均在0.90以上，表明藥劑濃度與抑制作用呈現(xiàn)較高的正相關(guān)。田間防效測定結(jié)果表明，異菌脲的田間防治效果最好，防效達到72.9％，施力科和劍斑稍差，代森