小麥磨粉品質(zhì)相關(guān)基因pina人工突變體的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、PIN蛋白是非常重要的品質(zhì)蛋白，包括兩種同源性很高的蛋白PINA和PINB，PIN蛋白直接決定小麥的籽粒硬度，并且具有天然的抗菌特性。編碼這兩個蛋白的基因pina和pinb位于5DS上，它們具有特殊的多色氨酸結(jié)構(gòu)域，推測其與PIN蛋白的功能密切相關(guān)。為了驗證色氨酸結(jié)構(gòu)域與PIN蛋白功能之間的關(guān)系，我們構(gòu)建了含不同數(shù)量色氨酸結(jié)構(gòu)域的pina人工突變體，本研究在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了pina基因人工突變體的真核表達載體，并以硬粒小麥Ofanto為試

2、驗受體材料，運用基因槍法，將外源Pina基因的人工突變體ABBC和ABBBC轉(zhuǎn)入到不含pina基因的四倍體硬粒小麥Ofanto中，并運用PCR和SDS-PAGE的方法對Ofanto轉(zhuǎn)基因后代進行分子鑒定。研究結(jié)果如下：
　　 （1）以植物表達載體pLRPT為基礎(chǔ)，構(gòu)建了以胚乳特異表達啟動子1Dx5驅(qū)動的Pina基因突變體的真核表達載體pLRPT-ABBC和pLRPT-ABBBC，并運用基因槍的方法進行轉(zhuǎn)化硬粒小麥Ofanto幼嫩

3、盾片。
　　 （2）對組培條件進行優(yōu)化，并使用優(yōu)化后的條件進行組織培養(yǎng)，獲得800余株再生苗。
　　 （3）根據(jù)pina基因的序列，設(shè)計合適的PCR引物，探索并優(yōu)化PCR條件，運用PCR的方法對轉(zhuǎn)基因苗進行鑒定，并篩選到13株陽性轉(zhuǎn)基因植株。
　　 （4）采用優(yōu)化的SDS-PAGE方法，對PCR檢測的陽性轉(zhuǎn)基因植株后代PINA突變體蛋白的表達進行了分析，共獲得外源基因正確表達植株8株。
　　 本實驗所得到