小麥磨粉品質相關基因pina人工突變體的遺傳轉化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、PIN蛋白是非常重要的品質蛋白,包括兩種同源性很高的蛋白PINA和PINB,PIN蛋白直接決定小麥的籽粒硬度,并且具有天然的抗菌特性。編碼這兩個蛋白的基因pina和pinb位于5DS上,它們具有特殊的多色氨酸結構域,推測其與PIN蛋白的功能密切相關。為了驗證色氨酸結構域與PIN蛋白功能之間的關系,我們構建了含不同數量色氨酸結構域的pina人工突變體,本研究在此基礎上構建了pina基因人工突變體的真核表達載體,并以硬粒小麥Ofanto為試

2、驗受體材料,運用基因槍法,將外源Pina基因的人工突變體ABBC和ABBBC轉入到不含pina基因的四倍體硬粒小麥Ofanto中,并運用PCR和SDS-PAGE的方法對Ofanto轉基因后代進行分子鑒定。研究結果如下:
   (1)以植物表達載體pLRPT為基礎,構建了以胚乳特異表達啟動子1Dx5驅動的Pina基因突變體的真核表達載體pLRPT-ABBC和pLRPT-ABBBC,并運用基因槍的方法進行轉化硬粒小麥Ofanto幼嫩

3、盾片。
   (2)對組培條件進行優(yōu)化,并使用優(yōu)化后的條件進行組織培養(yǎng),獲得800余株再生苗。
   (3)根據pina基因的序列,設計合適的PCR引物,探索并優(yōu)化PCR條件,運用PCR的方法對轉基因苗進行鑒定,并篩選到13株陽性轉基因植株。
   (4)采用優(yōu)化的SDS-PAGE方法,對PCR檢測的陽性轉基因植株后代PINA突變體蛋白的表達進行了分析,共獲得外源基因正確表達植株8株。
   本實驗所得到

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