稻瘟病菌假定Rpn2蛋白的生物信息學分析及基因敲除研究.pdf

1、蛋白糖基化可影響蛋白質的穩(wěn)定性、定位以及蛋白的分泌，從而在細胞功能中起重要作用。病原菌的蛋白往往需要糖基化使分泌到胞外而與植物受體蛋白起作用的激發(fā)子和其它致病因子。蛋白的糖基化是一個復雜的過程，需要一系列的酶參與。寡糖轉移酶是真核生物 N-連接糖基化過程中必不可少的酶之一，其可將寡糖核心轉移到內質網(wǎng)上新合成的多肽的Asn殘基上，形成糖蛋白前體。 此外，稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)是引起水稻等單子葉植物重要病害

2、稻瘟病的病原菌，也是研究植物病原真菌致病分子基理的重要模式生物。 本研究對稻瘟病菌MGG_03687.6基因編碼的假想蛋白MgRpn2進行了較為詳細的生物信息學分析，結果表明MgRpn2蛋白與已知絲狀真菌寡糖轉移酶(EC2.4.1.119)的一個亞單位核糖體結合蛋白Ⅱ(RibophorinⅡ，Rpn2)氨基酸序列具有高度同源性。用SignalP和TMHMM分析結果表明，其N端有一段信號肽，C端有3段跨膜結構；系統(tǒng)進化分析表明：M

3、gRpn2和其他絲狀真菌的核糖體結合蛋白Ⅱ以及釀酒酵母的ScSwplp之間進化距離較近。 構建了MGG_03687.6基因的敲除載體，獲得MGG_03687.6基因的四個功能缺失的突變體突變體△Mg3687-1、△Mg3687-2、△Mg3687-3、△Mg3687-4和2個異位整合突變體Mg03687-1-ec和Mg03687-2-ec。對敲除突變體表型初步分析的結果表明，其分生孢子的萌發(fā)率與附著胞的形成率分別在8小時和12小