海洋柴油降解菌性能的優(yōu)化及其生物載體的研究.pdf

1、目的：
　　 尋找海洋柴油降解菌株，探討構(gòu)建高效降解菌群，并行固化處理，為生物修復(fù)海水柴油污染提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 1．獲取柴油污染較嚴(yán)重的港口海水為分離源，接種于含柴油的人工海水培養(yǎng)基中，經(jīng)過五個(gè)周期(每個(gè)周期為5d)的富集、培養(yǎng)后，進(jìn)行分離純化，得到單個(gè)菌落，命名其為F9。采用形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特征分析及16srDNA測(cè)序等方法對(duì)分離得到的菌株進(jìn)行鑒定；
　　 2．對(duì)F9菌株的降解性能進(jìn)行

2、研究，紫外分光光度法測(cè)定不同溫度、pH、初始接種濃度、油濃度對(duì)其降解柴油的影響，并用氣相色譜-質(zhì)譜方法(GC-MS)分析其對(duì)柴油各組分的降解效能；
　　 3．以從柴油污染海水中富集、篩選得到的4株柴油高效降解菌株為基礎(chǔ)進(jìn)行組合優(yōu)化試驗(yàn)，并對(duì)其降解性能進(jìn)行研究，利用紫外分光光度法測(cè)定降解率，GC-MS方法分析菌群對(duì)柴油組分的降解；
　　 4．以海藻酸鈉-殼聚糖-小米為復(fù)合載體固定化混合菌群，紫外分光光度法測(cè)定其對(duì)柴油的降解

3、率，GC-MS方法分析菌群對(duì)柴油組分的降解。
　　 結(jié)果：
　　 1．F9菌株初步鑒定為不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)，并最接近于威尼斯不動(dòng)桿菌(Acinetobater venetianus)，二者同源性高達(dá)99.9％，菌株不產(chǎn)芽孢，嚴(yán)格需氧型，氧化酶陰性，過氧化氫酶陽性，不能利用D-葡萄糖、D-核糖、D-木糖和L-阿拉伯糖，只能在以檸檬酸鈉為碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，能夠利用硝酸鉀和硫酸銨作為氮源，不需要生長(zhǎng)因子

4、，在37℃條件下生長(zhǎng)，但不能在44℃下生長(zhǎng)；
　　 2．對(duì)F9菌株的柴油降解性能進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)9菌株在培養(yǎng)液人工海水培養(yǎng)基(MMC)為50mL，pH7.5，溫度為30℃，初始接種濃度為0.5%，柴油濃度為0.5%時(shí)對(duì)柴油的降解效果最佳，7d能達(dá)到90.24%，通過GC-MS分析觀察F9菌株對(duì)柴油的各組分均有一定的降解作用；
　　 3．在實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)4株柴油降解菌進(jìn)行優(yōu)化組合，構(gòu)建由S1、F9、Y9、W3組成的復(fù)合菌群

5、，且四株菌比例為SI∶F9∶Y9∶W3=1∶1∶2∶1時(shí)，該菌群在培養(yǎng)液條件為MMC為50mL、pH7.5、溫度30℃、初始接種濃度1%、柴油濃度為0.5%時(shí)，對(duì)柴油的降解效果最佳，2d能達(dá)到降解效率的71.25%;
　　 4．采用海藻酸鈉-殼聚糖-小米復(fù)合載體固定化混合菌群，降解3d后對(duì)柴油的降解效率達(dá)到94.98%，7d時(shí)降解率為95.15%，復(fù)合載體固定混合菌群后，既能對(duì)柴油有吸附和分散作用，又可充分利用混合菌群對(duì)柴油進(jìn)行