維生素類藥物的分析(

1、概述,維生素： 是維持人體正常代謝機(jī)能所必需的 微量營(yíng)養(yǎng)物資。 人體不能合成維生素。,VitA、D2、D3、 E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、葉酸、煙酸、泛酸等。,,分類,按溶解度分,-H VitA醇-COCH3 VitA醋酸酯-COC15H31 VitA棕櫚酸酯,R :,第一節(jié) 維生素A,,結(jié)構(gòu)：,性

2、質(zhì)：,溶解性：脂溶性不穩(wěn)定性：氧化成醛酸、脫水成脫水維生素、紫外吸收：325-328 nm，可用于鑒別與含量測(cè)定與三氯化銻顯色：產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色,（一）三氯化銻反應(yīng),反應(yīng)條件：無(wú)水無(wú)醇（水可使三氯化銻水解成氯化氧銻）,CHCl3,鑒別試驗(yàn),二、,,λmax為326nm一個(gè)吸收峰,λmax為350～390nm三個(gè)吸收峰,去水VitA（VitA3）,↓,VitA,立體異構(gòu)體氧化降解產(chǎn)物合成中間體,UV法,（一）,,維生素A2

3、維生素A3環(huán)氧化物維生素A醛維生素A酸,三氯化銻比色法,（二）,優(yōu)點(diǎn) 簡(jiǎn)便快速,λmax 618nm～620nm,標(biāo)準(zhǔn)曲線法,（二）,返 回,氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨堿),第二節(jié) 維生素B1,,,HCl,Cl-,（一）,溶解性,1、易溶于水,2、水溶液呈酸性,（二）,UV,共軛雙鍵,λmax = 246nm,與生物堿↓→↓,（三）,硫色素反應(yīng),（四）,（五）鹽酸根 呈氯化物的反應(yīng)，用于

4、鑒別。,ChP,,,,硫色素,,,＋2H,,VitB1,H+,H+,H+,H+,Cl-反應(yīng),,喹那啶紅－亞甲藍(lán)（紫紅→天藍(lán)）,反應(yīng)摩爾比為1：2,,（二）紫外分光光度法原理維生素B1片的測(cè)定討論,（1）靈敏度高，線性范圍寬（2）代謝產(chǎn)物不干擾，適用于 體液分析,第三節(jié) 維生素C,L－抗壞血酸,水溶性：酸性：旋光性：還原性：糖的性質(zhì)：呋喃環(huán)紫外吸收： 稀鹽酸中λmax為243，中性或堿性中

5、紅移至265,二烯醇結(jié)構(gòu),二酮基結(jié)構(gòu),二烯醇結(jié)構(gòu),△,糖類的顯色反應(yīng),50℃,結(jié)構(gòu)與糖類相似,C3－OH的pKa = 4.17,C2－OH的pKa = 11.57,,,一元酸,L(+)－抗壞血酸活性最強(qiáng),手性C（C4、C5）,*,*,與堿反應(yīng),1、與AgNO3反應(yīng),2、與2，6 - 二氯靛酚反應(yīng),(ChP2005),氧化型,,,玫瑰紅色,,,(ChP2005),（玫瑰色）,（無(wú)色）,,BP,0.01mol/L HCl,三、雜質(zhì)檢查

6、,1.溶液的澄清度與顏色：有色雜質(zhì) 分光光度法2.鐵、銅離子：原子吸收分光光度法,,指示劑 淀粉指示液,,H+,取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過(guò)的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6,,,,,（1）酸性

7、環(huán)境 HAC,（2）新沸冷H2O,減慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,趕走水中O2,減少O2的干擾,（4）附加劑干擾的排除,片劑 —— 滑石粉 —— 過(guò)濾,,,,,,USP,JP,,第四節(jié) 維生素D,維生素D2,一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì),維生素D3,,開環(huán)的甾體：具有甾類化合物的顯色反應(yīng)，可用于鑒別。,,,手性碳原子：具有旋光性，可用于鑒別。,多烯：可進(jìn)行紫外檢測(cè)。,二、鑒別試驗(yàn),1. 顯色反應(yīng),三氯化銻反應(yīng)

8、 橙紅色漸變粉紅,三氯化鐵反應(yīng) 橙黃色,二氯丙醇和乙酰氯反應(yīng) 綠色,2. 比旋度鑒別,維生素D2,維生素D3,溶 劑,濃 度,比旋度值,無(wú)水乙醇,無(wú)水乙醇,40mg/ml,5mg/ml,+102.5°～+107.5°,+105°～+112°,注意事項(xiàng)：應(yīng)于容器開啟30分鐘內(nèi)取樣， 在溶液配制后30分鐘內(nèi)測(cè)定。,3.區(qū)別反應(yīng)：

9、 以96%乙醇為溶劑，加乙醇和85%硫酸，D2顯紅色，在570nm處有最大吸收，D3顯黃色，在495nm處有最大吸收。,4.其他方法： TLC、HPLC、制備衍生物測(cè)熔點(diǎn),三、雜質(zhì)檢查,,維生素D2中麥角甾醇的檢查：加洋地黃皂苷溶液，混合，放置18h不得發(fā)生渾濁或沉淀。,,前維生素D的光照產(chǎn)物,四、含量測(cè)定方法,中國(guó)藥典（2005年版）采用正相高效液相色譜法測(cè)定維生素D的含量，定量方法為內(nèi)標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)物為鄰苯二甲酸二甲酯，該法分為

10、三個(gè)方法。固定相：硅膠流動(dòng)相：正己烷-正戊醇（997：3）,第二法：用于有雜質(zhì)的干擾的情況，步驟如下：1．皂化處理：皂化、乙醚提取、洗滌提取液、蒸除乙 醚、制備供試液A。2．凈化：供試液A經(jīng)液相色譜分離，準(zhǔn)確收集含有維 生素D及前維生素D混合物的全部流出液，制 備成供試液B。 固定相：ODS 流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水（50：50：2） 3．含量測(cè)定：

11、取供試液B按第一法測(cè)定。,第一法：用于無(wú)維生素A醇及其它雜質(zhì)的干擾的情況,第三法：用于經(jīng)第二法處理后仍有雜質(zhì)的干擾的情況。步驟如下：1．制備供試液：取供試液A，凈化，水浴加熱，得供 試液C。 制備對(duì)照液：對(duì)照品儲(chǔ)備液：稀釋、加熱。2．含量測(cè)定：在第一法的色譜條件下，交替精密進(jìn)樣 對(duì)照液和供試液，按外標(biāo)法定量。,返 回,苯并－二氫吡喃醇,第五節(jié) 維生素E,,,*,*

12、,*,dl－α－生育酚醋酸酯,苯環(huán) + 二氫吡喃環(huán) + 飽和烴鏈,1、UV,2、乙酰化的酚羥基 易水解,緘,緘,醌型化合物,,雜質(zhì)，需檢查,生育紅,,（一）,硝酸反應(yīng),橙紅色,（橙紅色）,生育紅,生育酚,,HNO3,,強(qiáng)氧化劑,生育酚,對(duì)-生育醌,,弱氧化劑,血紅色,= 41.0～45.5,λmax = 284nm,λmin = 254nm,0.01%無(wú)水乙醇中,UV法,（三）,薄層板 硅膠G,展開劑

13、 環(huán)己烷 -乙醚（4 ：1）,顯色劑 硫酸（105℃ 5′）,VitE Rf = 0.7?-生育酚 Rf = 0.5?-生育醌 Rf = 0.9,TLC法,（四）,2. 游離生育酚,雜質(zhì)檢查,三、,原理,,酸度 以NaOH滴定液（0.1mol/L）體積控制。,GC法（法定方法）,（一）,GC特點(diǎn),1、,選擇性好靈敏度高速度快分離效能好,揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、

14、極性強(qiáng)→衍生化易受樣品蒸氣壓限制,載氣→N2固定液→硅酮（OV-17）擔(dān)體→硅藻土或高分子多孔小球柱溫→265℃檢測(cè)器→氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)內(nèi)標(biāo)→正三十二烷 n ≥ 500 R≥2,內(nèi)標(biāo)法加校正因子,內(nèi)標(biāo)法,供試液（樣品+內(nèi)標(biāo)）,內(nèi)標(biāo)物,對(duì)照液（對(duì)照+內(nèi)標(biāo)）,是樣品中不存在的物質(zhì)與被測(cè)組分峰靠近能與各組分完全分離與被測(cè)組分的量接近,,（二）HPLC法 外標(biāo)法 此外，還有鈰