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文檔簡介
1、基因工程藥物的研究現(xiàn)狀——乙肝疫苗,,引言: 1953年Waston和Crick發(fā)現(xiàn)遺傳物質(zhì)DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu),給整個生物學乃至整個人 類社會帶來了一場革命。此后,一系列有關(guān)遺傳信息即基因研究的成果很快的向應用和開發(fā)拓展。1972年,美國斯坦福大學P.Berg博士研究小組使用EcorRⅠ,第一次在體外獲得了包括SV40 DNA和λ噬菌體DNA的重組DNA分子。1973年,S.Cohen等將兩中分別編碼卡那霉
2、素和四環(huán)素的抗性基因相連,構(gòu)建出重組的DNA分子,然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌,獲得了既抗卡那霉素又抗四環(huán)素的轉(zhuǎn)化子菌落,這是第一次成功的基因克隆實驗,標志著基因工程的誕生。1977年Boyer首次獲得生長激素抑制因子的克隆,1982年第一個基因工程重組產(chǎn)品——人胰島素被批準應用,進入市場。迄今為止,已有50多種基因工程藥物上市,近千種處于研發(fā)狀態(tài)?;蚬こ趟幬镆呀?jīng)形成一個巨大的高新技術(shù)產(chǎn)業(yè),產(chǎn)生了不可估量的社會效益和經(jīng)濟效益,由于基因藥物的
3、出現(xiàn),可以大大改善人類的生命質(zhì)量,,乙型肝炎病毒(hepatitis B virus HBV),其表面由HBsAg(乙肝表面抗原)構(gòu)成。在HBV攜帶者血液中存在大量的HBsAg。目前,HBV不能再離體組織或細胞內(nèi)復制,無法用傳統(tǒng)方法制造疫苗。但經(jīng)研究證實HBV攜帶者血液中HBsAg提純,去除HBV和其他雜質(zhì)所制成的亞單位血源乙型肝炎疫苗可有效預防HBV的感染。乙肝疫苗的主要有效成分為HBsAg均吸附于佐劑【多為Al(OH)3】上。,
4、一 、簡介,乙 肝 五 項 檢 測,表面抗原(HBsAg) 體內(nèi)是否存在乙肝病毒表面抗體(抗-HBs) 是否有保護性e抗原(HBeAg) 病毒是否復制既具有傳染性e抗體(抗-HBe) 病毒復制是否受到抑制核心抗體(抗-HBc) 是否感染過乙肝病毒,二 、臨床上應用的乙肝疫苗的種類,,重組痘苗乙型肝炎疫苗重組CHO細胞乙型肝炎疫苗重組釀酒酵母乙型肝炎疫苗,血液乙型肝炎疫苗,基因工程疫苗,三、什么
5、是重組乙型肝炎疫苗(CHO細胞),采用基因工程技術(shù)將無傳染性的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的S基因片段克隆到載體,用重組載體轉(zhuǎn)染真核生物CHO細胞通過細胞培養(yǎng)、增殖、分泌出HBsAg到培養(yǎng)液中,收集分泌液,經(jīng)高速離心、純化、除菌后,加入佐劑吸附(氫氧化鋁)而制成。,CHO?,CHO——(Chinese hamster ovary)【中國倉鼠卵母細胞】,該細胞具有不死性,可以傳百代以上。全世界應用于人類疾病治療或預防的基因工程產(chǎn)品大部
6、分是由CHO細胞和大腸桿菌生產(chǎn)的。 另外CHO細胞屬于成纖維細胞,是一種非分泌性細胞,本身很少分泌CHO內(nèi)源蛋白,因此對目標蛋白分離純化工作十分有利。,,四、重組CHO細胞乙型肝炎疫苗的生產(chǎn)工藝,,五、重組CHO細胞乙肝疫苗的優(yōu)缺點,優(yōu)點:CHO細胞表達的重組HepB是高等真核細胞表達產(chǎn)物,其天然結(jié)構(gòu)較低等的真核細胞酵母表達的HBsAg蛋白更適合人體吸收,生產(chǎn)工程中不同于酵母使用硫氰酸鹽處理,安全性好。缺點:產(chǎn)
7、生一些副作用,例如 紅腫、疼痛、發(fā)癢、手臂酸重等癥狀,或者是產(chǎn)生低熱、乏力、惡心、食欲不振等與一般疫苗相似的輕微反應。,五、疫苗使用方法,一般易感者使用10µg/支,每次注射一支,1個月及6個月時注射第2、3支。全程注射3次。新生兒使用20µg/支,第一針在出生后24小時內(nèi)注射,其余兩針同上。高危人群,可用20µg/支。注射部位為上臂三角肌肌內(nèi)。,不宜接種乙肝疫苗的人群,有血清病、支氣管哮喘、過敏性蕁
8、麻疹及對青霉素、磺胺等一些藥物過敏者禁用。低體重、早產(chǎn)、剖腹產(chǎn)等非正常出生的新生兒,暫時不宜接種乙肝疫苗。雖然乙肝疫苗對這部分新生兒并無害處,但因其自身的體質(zhì)狀況易發(fā)生偶合事件,因此最好推遲接種時間。,六、現(xiàn)有疫苗的發(fā)展史及存在的問題,現(xiàn)有疫苗存在的問題,,,什么是成纖維細胞?,定義: 普遍存在于結(jié)締組織中的一種中胚層來源的細胞。分泌前膠原、纖連蛋白和膠原酶等細胞外基質(zhì)成分,傷口愈合過程中可遷移到傷口進行增殖。
9、成纖維細胞是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,細胞呈梭形或扁的星狀,具有突起。根據(jù)不同的功能活動狀態(tài),將細胞分為成纖維細胞和纖維細胞二型:成纖維細胞乃是功能活動旺盛的細胞,細胞和細胞核較大,輪廓清楚,核仁大而明顯,細胞質(zhì)弱嗜堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動;纖維細胞功能活動不活躍,細胞輪廓不明顯,核小著色深,核仁不明顯,細胞質(zhì)少。此二型細胞可互相轉(zhuǎn)化。 作用原理: 成纖維細胞攝取所需的氨基酸,如脯氨酸和賴氨酸等,在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核蛋白
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