染色體制備及識別

1、人類淋巴細胞染色體制備、G顯帶及核型分析,淋巴細胞染色體制備,一、常用設備 無菌工作臺 隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱 電熱式水浴箱 電熱干燥箱 光學顯微鏡 離心機,二、常用試劑 培養(yǎng)基（1640） 新生小牛血清 植物血球凝集素（PHA） 雙抗（青、鏈霉素） 抗凝劑（肝素，

2、EDTA） 秋水仙堿（胺） 甲醇、冰乙酸 胰蛋白酶 Giemsa染液,三、常用易耗品 玻璃培養(yǎng)瓶 刻度玻璃離心管 翻口膠塞 玻璃滴管 載玻片,四、細胞培養(yǎng)和G顯帶染色體制備1 細胞培養(yǎng)1640+10%牛血清+PHA 種全血

3、0.5ml 37℃ 培養(yǎng)70h 加秋水仙堿 2h2 染色體制備 培養(yǎng)物 離心（2000轉(zhuǎn)/分鐘） 去上清 加 0.075M KCL 低滲處理 加1ml3:1甲醇、冰乙酸 離心 甲醇、冰乙酸固定二次 滴片 60

4、 ℃烤片2h,,,,,,,,,,,,,,3 G顯帶 0.025%胰蛋白酶染色體玻片 處理30-90秒 2-5%Giemsa染色5-10分鐘 自來水蒸餾水沖洗 干燥 顯微鏡觀察4 染色體計數(shù)和核型分析染色體計數(shù)：一般情況

5、下計數(shù)30個分裂相，遇嵌合體或性畸型時計數(shù)100個分裂相核型分析：一般分析3個分裂相,,,,,,G顯帶染色體識別,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,1 2 3,4 5 6 7,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,8

6、 9 10 11,12 13 14 15,,,,,,,,,,,,,16 17 18 19,,X,20 21 2

7、2 Y,1 2 3 4 5 6 7 X,8 9 10 11 12 13 14 15,16 17 18 19 20 21