病毒總論 ppt課件

1、病毒學(xué)總論,3000BC，埃及孟非思壁畫中長老患小兒麻痹癥。,病毒(virus)的發(fā)現(xiàn)1892年發(fā)現(xiàn)第一個病毒即煙草花葉病毒1898年發(fā)現(xiàn)動物口蹄疫病毒首先被證實(shí)對人類有致病性的是黃熱病毒（1901年發(fā)現(xiàn)）,病毒（virus） 是一類形態(tài)微小、無細(xì)胞結(jié)構(gòu)、僅含單一核酸、專性細(xì)胞內(nèi)寄生、以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型微生物。特征 1 體積微??；以納米（nm）為單位 2 非細(xì)胞

2、結(jié)構(gòu)， 結(jié)構(gòu)簡單，僅含一種核酸； 3 嚴(yán)格的胞內(nèi)寄生（分子水平寄生；） 4 以復(fù)制方式繁殖； 5 抵抗力特殊，對抗生素不敏感。,1、臨床約70-80%傳染病是由病毒引起的;2、病毒性疾病對人類健康危害極大;3、近20年來，新病毒不斷被發(fā)現(xiàn)，由此引發(fā)的病毒性疾病正越來越多的被人們所關(guān)注.,第一節(jié) 病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)與分類,病毒體（virion)——完整的具有傳染性的病毒顆粒，有典型的形態(tài)和傳染性。,1、

3、測量單位——納米（nm） 3、觀察工具——電子顯微鏡2、大多數(shù)病毒的直徑小于150 nm,一 病毒的大小與形態(tài),,,立克次體450nm,,衣原體390nm,病毒的形態(tài)： 多為球型，還有桿狀、子彈狀、磚塊狀及蝌蚪狀等。,乙肝病毒,腺病毒,輪狀病毒,狂犬病毒,子彈狀的狂犬病毒,噬菌體,天花病毒,Ebola 病毒,HSV-2,二 、病毒的結(jié)構(gòu)與功能,核衣殼,,裸病毒,包膜（envelope）:包繞在核衣殼外，上

4、常有刺突（spike），是病毒的表面抗原。,,輔助結(jié)構(gòu)：,EBV結(jié)構(gòu)模式圖,,1、病毒核酸,(1)化學(xué)成分為DNA或RNA，據(jù)此將病毒分DNA病毒和RNA病毒。 (2)核酸可線型或環(huán)型、分單股或雙股，一般DNA病毒為雙股，RNA病毒為單股；大小相差懸殊。 (3)攜帶病毒的全部遺傳信息，是病毒的基因組，控制病毒的生殖、遺傳和變異。,,2、病毒衣殼：由多肽構(gòu)成的殼微粒組成，,有三種排列方式：,螺旋對稱立體對稱復(fù)合對稱,病

5、毒的幾種對稱類型（據(jù)殼粒排列方式分為）,,螺旋對稱型（helical symmetry),,,20面體立體對稱型(icosahedral symmetry)：大多數(shù)球狀病毒屬之；,,20面體立體對稱型,,螺旋對稱型,,（3）復(fù)合對稱型(complex symmetry,3、病毒包膜,,,,,,包膜（envelope）:包繞在核衣殼外，上常有刺突（spike），是病毒的表面抗原。,包膜,,4、病毒的蛋白質(zhì),結(jié)構(gòu)蛋白：是組成病毒體的蛋

6、白成分，可離心沉淀后分離純化。 （1）衣殼蛋白： （2）基質(zhì)蛋白： （3）包膜蛋白：,,,,,,,非結(jié)構(gòu)蛋白：可存在于病毒體內(nèi)也可僅存在于宿主細(xì)胞內(nèi)。 （1）病毒內(nèi)所有的重要的酶類； （2）抑制宿主細(xì)胞生物合成或抑制病毒抗原經(jīng)MHC遞呈的蛋白； （3）轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞的作用； （4）抗細(xì)胞因子或抗細(xì)胞凋亡作用。,,三、病毒的分類,分類原則：1、核酸類型和結(jié)構(gòu)；

7、 2、病毒體的形狀和大?。?3、病毒體的形態(tài)結(jié)構(gòu)； 4、對脂溶劑的敏感性。,1、DNA病毒類；2、RNA病毒類； 3、逆轉(zhuǎn)錄病毒類。,三、亞病毒,1、擬病毒 不具備單獨(dú)侵染性的RNA(擬病毒)一般僅有裸露的RAN,或者DNA所組成，是在真病毒中寄生的一種有缺陷的病毒。需要輔助病毒的衣殼蛋白。引起植物病變2、類病毒(viroids):植物病毒，類病毒是一種具有傳染性的單鏈RNA病原體。它們比病毒要小，無包

8、膜，并且沒有通常病毒所有的蛋白質(zhì)外殼。3、朊病毒 /朊粒(prion):是一類不含核酸而僅由蛋白質(zhì)構(gòu)成的可自我復(fù)制并具感染性的亞病毒因子。,基本特點(diǎn),朊病毒又稱蛋白質(zhì)侵染因子（又稱毒阮）。是一類能侵染動物并在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的小分子無免疫性疏水蛋白質(zhì)。與常規(guī)病毒一樣，有可濾過性、傳染性、致病性、對宿主范圍的特異性，但它比已知的最小的常規(guī)病毒還小得多（約30～50nm）。電鏡下觀察不到病毒粒子的結(jié)構(gòu)，且不呈現(xiàn)免疫效應(yīng)，不誘發(fā)干擾素產(chǎn)生

9、，也不受干擾作用。朊病毒對人類最大的威脅是可以導(dǎo)致人類和家畜患中樞神經(jīng)系統(tǒng)退化性病變，最終不治而亡。 （如瘋牛病）,,,,,,，,,,,,,,……,,1997年諾貝爾醫(yī)學(xué)或生理學(xué)獎的獲得者美國生物學(xué)家斯垣利·普魯辛納（ S. B. Prusiner）就是由于研究朊病毒作出卓越貢獻(xiàn)而獲此殊榮的。人的朊病毒病已發(fā)現(xiàn)有4種：庫魯?。↘u-rmm）、克——雅氏綜合癥（CJD）、格斯特曼綜合癥（GSS）及致死性家庭性失眠癥（FFI）

10、。,,第二節(jié) 病毒的增殖,,一、病毒的增殖過程,增殖方式——自我復(fù)制(selfreplication),復(fù)制周期：1、吸附和穿入(absorption and penetration)2、脫殼(uncoating)3、生物合成(biosynthesis)4、裝配與釋放(assembly and release),（一）吸附和穿入(absorption and penetration)吸附：病毒的表面配體位點(diǎn)與細(xì)胞表面特異性受

11、體結(jié)合；穿入：病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。,吸附,胞飲方式穿入,,（二）脫殼(uncoating)： 病毒核酸游離于宿主細(xì)胞內(nèi)。,病毒核酸,,病毒核酸,,（三）生物合成(biosynthesis)：,早 期： 基因組在細(xì)胞內(nèi)合成非結(jié)構(gòu)蛋白（病毒復(fù)制酶及抑制細(xì)胞正常生物合成的抑制酶）。,晚 期： 根據(jù)基因組的指令在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制病毒核酸合成結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白,隱蔽期,根據(jù)基因組轉(zhuǎn)錄mRNA及轉(zhuǎn)譯蛋白質(zhì)的不同，生物合成可分六

12、大類：,1、DNA病毒（雙鏈）： 細(xì)胞核內(nèi)合成DNA，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)合成病毒蛋白。,,依賴DNA的RNA多聚酶,早期mRNA,,轉(zhuǎn) 譯,早期蛋白,藥物作用的靶,,晚期：,,解鏈,正鏈DNA負(fù)鏈DNA,,DNA多聚酶,子代DNA,,轉(zhuǎn)錄,晚期mRNA,,晚期蛋白,病毒衣殼蛋白及其他結(jié)構(gòu)蛋白,2、RNA病毒（單鏈）： 多數(shù)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)合成子代RNA及病毒蛋白。,（1）正單鏈RNA病毒（有mRNA功能）：,正單鏈RNA,復(fù)制,子代

13、RNA,,結(jié)構(gòu)蛋白（衣殼蛋白等）,非結(jié)構(gòu)蛋白（依賴RNA的RNA多聚酶）,,,,雙鏈RNA（復(fù)制中間型）,,藥物作用的靶,,（2）負(fù)單鏈RNA病毒（有依賴RNA的RNA多聚酶）：,負(fù)單鏈RNA,,依賴RNA的RNA多聚酶,正單鏈RNA（有mRNA功能）,,,子代RNA,結(jié)構(gòu)蛋白（衣殼蛋白等）,雙鏈RNA（復(fù)制中間型）,,藥物作用的靶,,解鏈,（3）逆轉(zhuǎn)錄病毒（有逆轉(zhuǎn)錄酶，即依賴RNA的DNA多聚酶）：,單鏈RNA,,逆轉(zhuǎn)錄酶,

14、,,進(jìn)入細(xì)胞核,,整合（前病毒）,,子代病毒RNA,,病毒mRNA,,病毒蛋白質(zhì),,腫瘤發(fā)生,藥物作用的靶,,（四）裝配與釋放(assembly and release),裂解細(xì)胞后病毒釋放出來,,,,,,,出芽釋放,,出芽釋放,病毒增殖引起的細(xì)胞病變效應(yīng)：,（一）損傷： 1、無包膜病毒：阻斷或抑制細(xì)胞正常代謝，裂解細(xì)胞； 2、有包膜病毒：影響細(xì)胞功能及其正常代謝可致細(xì)胞死亡；有些則形成細(xì)胞間橋或引起細(xì)胞

15、融合而致細(xì)胞損傷等。,（二）干擾現(xiàn)象(interference)： 1、概念：兩種病毒同時感染同一細(xì)胞時，可發(fā)生一種病毒的增殖抑制另一種病毒復(fù)制的現(xiàn)象，即干擾現(xiàn)象。,2、產(chǎn)生原因： （1）第一種病毒感染細(xì)胞后使細(xì)胞表面受體或代謝途徑發(fā)生變化； （2）病毒感染細(xì)胞后可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抑制病毒復(fù)制的一組蛋白（干擾素，interferon，IFN）,（三）病毒的異常增殖,1、缺陷干擾顆粒（defective interferi

16、ng particles,DIP）,缺陷病毒（defective virus）：帶有不完整基因組的病毒；當(dāng)缺陷病毒不能復(fù)制但卻能干擾同種成熟病毒體進(jìn)入細(xì)胞時稱DIP；具有兩面性，一則干擾野毒株復(fù)制，二則在野毒株完整基因的輔助下可增殖出完整病毒。,2、頓挫感染（abortive infection） 病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后，由于細(xì)胞缺乏病毒復(fù)制所需的酶或能量等必要條件，使病毒在其中不能合成自身成分，或雖合成病毒核酸及

17、蛋白質(zhì)，卻不能組裝成完整的病毒體，是為頓挫感染。,3、衛(wèi)星病毒：基因組缺損的病毒,二、病毒的培養(yǎng)方法：,（一）動物接種 1、不同的病毒，易感動物不同，常用動物有：小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴等； 2、接種的途徑也有多種，可：皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔、靜脈等接種； 3、病毒→動物→動物出現(xiàn)感染癥狀，據(jù)癥狀鑒定病毒或取病變組織進(jìn)一步檢查。,（二）雞胚培養(yǎng),1、接種途徑有：尿囊腔、羊膜腔、卵黃囊、絨毛尿囊膜2、培養(yǎng)數(shù)天后，

18、觀察雞胚情況或取培養(yǎng)物進(jìn)一步鑒定,尿囊腔接種,羊膜腔接種,尿囊腔,羊膜腔,卵黃囊接種,絨毛尿囊膜接種,卵黃囊,絨毛尿囊膜,（三）組織培養(yǎng)（最常用細(xì)胞培養(yǎng)）,1、優(yōu)點(diǎn)： （1）便于純化病毒； （2）可直接觀察細(xì)胞變化（包括細(xì)胞出現(xiàn)病變或轉(zhuǎn)化）； （3）可對病毒的復(fù)制進(jìn)行基礎(chǔ)性研究； （4）可進(jìn)行空斑純化病毒克?。?（5）可滴定病毒含量。,2、細(xì)胞種類： （1）原代細(xì)胞： 以無菌手續(xù)采動物等

19、的組織切碎洗凈后用胰蛋白酶消化得分散的單個細(xì)胞，加培養(yǎng)液在細(xì)胞瓶內(nèi)培養(yǎng)所獲得的單層貼壁細(xì)胞為原代細(xì)胞； 原代細(xì)胞消化、重新分裝并培養(yǎng)所得細(xì)胞為次代細(xì)胞。 特點(diǎn)：對病毒易感性高，主要作為自標(biāo)本中分離的工具。,（3）二倍體細(xì)胞： 在體外分裂50-100代后仍保持其二倍染色體數(shù)目的單型細(xì)胞，常用人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞。,（2）傳代細(xì)胞系： 能在體外持續(xù)增殖傳代的細(xì)胞系，多由

20、癌細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而成。,3、病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的檢查與鑒定,（1）觀察細(xì)胞變化(cytopathic effect,CPE)：CPE——病毒感染細(xì)胞后引起的細(xì)胞病變。,正常成纖維細(xì)胞,單純皰疹病毒感染 后細(xì)胞變圓等,呼吸道合胞病毒感染 后形成多核巨細(xì)胞,,,（2）病毒感染細(xì)胞后形成嗜酸性或嗜堿性包涵體,狂犬病毒感染后在腦細(xì)胞的胞漿內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性圓形或橢圓形的包涵體，可供輔助診斷.,病毒的遺傳變異,病毒基因的重組與重配：

21、 有親緣關(guān)系的兩種病毒感染同一細(xì)胞時，經(jīng)相互作用后，病毒間交換核酸片段，發(fā)生基因重組(recombination)。 分節(jié)段基因組病毒的基因重組(交換基因節(jié)段）稱重配(reassortment)。發(fā)生幾率較高。,,病毒變異株：,病毒基因改變而發(fā)生病毒生物學(xué)性狀改變，該毒株若能穩(wěn)定傳代即為變異株（variant).如： 溫度敏感突變株 宿主范圍突變株 病毒毒力變異株 抗原性變異株,,遺傳變異意義：,

22、1、變異使病毒逃逸免疫監(jiān)視，造成疾病流行2、變異使抗病毒治療造成困難 3、變異改變了病毒抗原抗體，造成檢測的困難。4、變異改變了病毒的毒力——可獲得減度疫苗,第三節(jié) 病毒的感染與免疫,,1、水平傳播(horizontal transmission),病毒在人群不同個體間的傳播，稱水平傳播。,人群 人群,呼吸道、消化道皮膚粘膜、醫(yī)源性,,,一、病毒的傳播方式,2、垂直傳播

23、(vertical transmission),病毒通過胎盤或產(chǎn)道，直接由親代傳給子代的方式，稱垂直傳播。,,病毒 母體 新生兒 胎盤 顯 隱

24、 胎 受 先 流性 性 兒 染 天 產(chǎn)感 感 正 胎 畸 死染 染 常 兒 形 胎,,,,,,,,,,,,,,,,經(jīng)產(chǎn)道,經(jīng)血,二 、 病毒的致病機(jī)制,一、細(xì)胞水平的致病機(jī)制,（1）溶

25、細(xì)胞型感染： 多見于無包膜、殺傷性強(qiáng)的病毒，常引起急性感染。,,,,,,（2）改變細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),,,,,,為特異性抗體或CTL細(xì)胞識別,抗原,,（1）細(xì)胞膜表面出現(xiàn)嵌合有病毒特異抗原的蛋白成分,,（2）數(shù)個細(xì)胞間胞膜互相融和而形成多核巨細(xì)胞,,,,,,,,,,（3）大量子代病毒的釋放及機(jī)體免疫因子介導(dǎo)細(xì)胞死亡,（3）包涵體形成:,,病毒合成的場所病毒顆粒的堆積 細(xì)胞對病毒感染的反應(yīng)產(chǎn)物,（4）細(xì)胞增生與細(xì)胞轉(zhuǎn)化,（1）細(xì)胞增生

26、：,病毒,細(xì)胞,,,細(xì)胞內(nèi)DNA合成加快,,細(xì)胞增生,可能與腫瘤的發(fā)生有關(guān),細(xì)胞轉(zhuǎn)化,病毒,培養(yǎng)細(xì)胞,,,細(xì)胞轉(zhuǎn)化,細(xì)胞形態(tài)變化繁殖加快成堆生長,,細(xì)胞核,（5）病毒基因的整合：,,,,細(xì)胞核,,,1、逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制時以DNA整合入細(xì)胞染色體中；,2、失常式整合，DNA病毒多見，病毒的DNA偶而以片段整合入細(xì)胞的染色體DNA中。,(6)細(xì)胞凋亡：,誘導(dǎo)因子（如病毒等）,細(xì)胞,死亡基因激活,,,,,,細(xì)胞膜鼓泡細(xì)胞核濃縮染色體D

27、NA降解,電泳時有階梯式條帶,,二、機(jī)體水平的致病機(jī)制,(1)病毒對免疫系統(tǒng)的損傷,(2)免疫復(fù)合物引起的損傷,(3)抗體增強(qiáng)病毒感染作用,(4)病毒感染可引起免疫應(yīng)答的功能紊亂,三、病毒的感染類型,隱性感染 顯性感染,急性感染 持續(xù)性感染,慢性感染 (chronic infection)潛伏感染 (latent infection) 慢發(fā)病毒感染 (slow viru

28、s infection,,,,,,,,四 抗病毒免疫,非特異性免疫特異性免疫,,(一)非特異性免疫,1、遺傳因素：2、宿主年齡及生理狀態(tài)3、屏障作用：4、細(xì)胞作用：巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等5、病毒抑制物：6、炎癥反應(yīng)：7、干擾素（IFN）：,1 、干擾素（interferon,IFN）：,(1)概念：是個體出生后，機(jī)體受到病毒或其他干擾素誘生劑刺激巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及體細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生的一種糖蛋白。,(2)抗病毒特點(diǎn)：,

29、A.廣譜抗病毒活性，但只抑制病毒而無殺病毒功能； B.抗病毒作用有相對的種屬特異性，一般在同種細(xì)胞中活性最高； C.調(diào)節(jié)免疫功能； D.抑制腫瘤細(xì)胞的作用,α-IFN：人白細(xì)胞產(chǎn)生 β-IFN：人成纖維細(xì)胞產(chǎn)生 γ-IFN：T細(xì)胞產(chǎn)生,,(3)種類：,,Ⅰ型IFN,Ⅱ型IFN,,抗病毒作用強(qiáng)于Ⅱ型,免疫調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于Ⅰ型，稱免疫IFN,(4)抗病毒作用機(jī)制：需由宿主細(xì)胞介導(dǎo)。,α/β干擾素,α/β干擾素,,細(xì)胞的

30、干擾素受體,,細(xì)胞合成抗病毒蛋白,,,降解mRNA抑制多肽鏈延伸抑制轉(zhuǎn)譯,,活化巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞,,促進(jìn)多種細(xì)胞MHC-I類抗原表達(dá),IFN的誘生及抗病毒機(jī)制,γ干擾素,γ干擾素,,細(xì)胞的干擾素受體,,細(xì)胞合成抗病毒蛋白,,,降解mRNA抑制多肽鏈延伸抑制轉(zhuǎn)譯,,促進(jìn)多種細(xì)胞MHC-II類抗原表達(dá),,促進(jìn)巨噬細(xì)胞表達(dá)Fc受體，協(xié)同誘導(dǎo)TNF，促進(jìn)巨噬細(xì)胞發(fā)揮抗病毒作用。,2 、 NK細(xì)胞：不受MHC限制，也不依賴抗體。

31、,IFN等細(xì)胞因子,,NK細(xì)胞,激活,,識別“靶”,,,釋放穿孔素釋放α/βTNF，靶細(xì)胞溶酶體破壞活化靶細(xì)胞核酸內(nèi)切酶，降解自體DNA,,殺傷腫瘤細(xì)胞及表達(dá)抗原的自體細(xì)胞,(二)特異性免疫,病毒蛋白,,活化B細(xì)胞,活化T細(xì)胞,,,體液免疫,,細(xì)胞免疫,抗原的加工呈遞,,,1 、單核/巨噬細(xì)胞: 抗原的加工與呈遞,,,,內(nèi)源性抗原,,蛋白酶體,,,,CD8+T細(xì)胞,,CTL殺傷病毒,清除病毒感染的主要機(jī)制,A.與MH

32、C-I分子結(jié)合：,肽段,B、與MHC-II分子結(jié)合：,,,外源性抗原,,溶酶體,MHC-II,,CD4+T細(xì)胞,,CD4+T活化,,吞噬溶酶體,,合成和分泌大量細(xì)胞因子,,輔助B細(xì)胞成熟為漿細(xì)胞,,形成DTH,,分泌抗體,肽段,2.體液免疫：,病毒,,機(jī)體,,IgM抗體：最早出現(xiàn),,IgG：出現(xiàn)晚,,IgA：粘膜感染,,中和抗體、非中和抗體,1、中和抗體——可中和病毒的感染,作用機(jī)制： （1）改變病毒表面結(jié)構(gòu)或與病毒表位

33、結(jié)合以阻止病毒的吸附； （2）與病毒形成免疫復(fù)合物有利于巨噬細(xì)胞的吞噬和清除； （3）有包膜病毒與抗體結(jié)合后，激活補(bǔ)體而使病毒裂解。,,,,激活補(bǔ)體,,,病毒裂解,有包膜病毒,2、非中和抗體： （1）因其產(chǎn)生抗原與病毒入侵細(xì)胞無關(guān)，故不能中和病毒的感染； （2）有時有診斷價值； （3）常見種類有：血凝抑制抗體、補(bǔ)體結(jié)合抗體等。,3、抗體介導(dǎo)對靶細(xì)胞的作用,,NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞,,ADCC作用,3.細(xì)胞免疫

34、（特異性免疫以此為主）,病毒,機(jī)體,致敏Tc細(xì)胞（CTL）,致敏TDTH,殺傷病毒感染的靶細(xì)胞,,,,,釋放多種細(xì)胞因子，直接破壞病毒或調(diào)理吞噬的功能,,(1)殺傷性T細(xì)胞（CTL）：,CTL,CTL,CTL,,分泌細(xì)胞毒素,,靶細(xì)胞破壞,,分泌穿孔素,,激活靶細(xì)胞內(nèi)的酶,,靶細(xì)胞裂解或凋亡,病毒感染恢復(fù)的主要機(jī)制,(2)輔助性T（TH）細(xì)胞：,TH 細(xì)胞,,輔助B細(xì)胞成熟為漿細(xì)胞,,合成和分泌大量細(xì)胞因子,,分泌抗體,,活化CT

35、L及巨噬細(xì)胞,(3)細(xì)胞因子：,CD4T細(xì)胞,病毒抗原,,,分泌抗病毒因子（IFN、TNF）,,激活CTL、TH、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞,抑制病毒復(fù)制,清除靶細(xì)胞的病毒,（四）免疫病理作用,1、CTL細(xì)胞在殺傷病毒感染的靶細(xì)胞的同時，也造成了細(xì)胞的損傷，并在感染局部引起炎癥反應(yīng)； 2、當(dāng)病毒抗體親和力底或與抗原比例不當(dāng)時，可在體內(nèi)形成免疫復(fù)合物的沉積而引起III型超敏反應(yīng)； 3、病毒感染致“隱蔽抗原”的暴露可

36、誘發(fā)自身免疫病。,,第四節(jié) 病毒微生物學(xué)檢查,（一）、選擇采標(biāo)本的時間：1、病毒分離鑒定一般取發(fā)病初期或急性期標(biāo)本；2、血清學(xué)診斷取患者早期（測IgM)和恢復(fù)期雙份血液。,（二）不同病毒感染采不同標(biāo)本： 呼吸道感染——采鼻咽分泌物；肺部感染——采痰液 腸道感染——采糞便； 病毒血癥——采血液 神經(jīng)系統(tǒng)感染——采腦脊液。,一、標(biāo)本的采集與送檢：,一、病毒感染的檢查方法,標(biāo)本送檢： 1、標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢

37、； 2、如不能及時檢查，標(biāo)本宜置冰壺內(nèi)保存，病變組織可置于50%甘油鹽水中低溫保存； 3、標(biāo)本的長期保存應(yīng)置于-70℃低溫冰箱，或-196℃液氮罐中。,病毒的分離培養(yǎng)和鑒定：,（一）細(xì)胞培養(yǎng)（最常用）：,標(biāo)本,,原代細(xì)胞,,傳代細(xì)胞,,細(xì)胞病變血細(xì)胞吸附PH值改變等,,特異性抗體鑒定,（二）雞胚接種,尿囊腔接種,羊膜腔接種,流感病毒,流感病毒,尿液,羊水,,,,血凝及血凝抑制試驗 鑒定病毒,（三

38、）動物培養(yǎng)（少用）,流感病毒+紅細(xì)胞 血凝,,流感病毒+特異抗體 血凝被抑制,,雞胚接種,二、病毒感染的快速檢查方法：,（一）測抗原：,標(biāo)本,+,熒光標(biāo)記抗體（已知）,酶標(biāo)記抗體（已知）,,,熒光顯微鏡觀察,加底物后觀察,,檢查病毒抗原,1、免疫熒光技術(shù)：直接法：標(biāo)本+熒光標(biāo)記抗體→熒光顯微鏡觀察間接法：標(biāo)本+抗體+熒光標(biāo)記二抗→熒光顯微鏡觀察,2、酶免疫技術(shù)： 酶免疫組化法：

39、 標(biāo)本+酶標(biāo)抗體+酶的底物→光學(xué)顯微鏡觀察顏色變化 ELISA法：抗體或抗原（反應(yīng)板）+待檢抗原或抗體+酶標(biāo)抗體或抗原 +底物 → 比色計測底物顏色,測抗體（多用ELISA法）：,IgM型抗體：早期診斷價值； IgG型抗體：應(yīng)用早期及恢復(fù)期雙份血清，后者抗體效價是前者的4倍以上時，有輔助診斷價值； IgG型抗體（感染后期）：隨訪測抗體效價，如有4倍降低，有輔助診斷價值。,病毒感染的血清學(xué)診斷（雙份血清）,１、

40、中和試驗　病毒+待檢血清（系列稀釋）→組織細(xì)胞→觀察CPE,２、血凝抑制試驗　病毒＋紅細(xì)胞（雞、人等）→血凝現(xiàn)象　病毒＋待檢血清＋紅細(xì)胞（雞、人等）→血凝現(xiàn)象消失,病毒核酸的測定：,（一）病毒基因探針法：,1、標(biāo)本,病毒基因探針（標(biāo)記）,+,,雜交,放射自顯影生物素-親和素系統(tǒng),2、Southern印跡法,標(biāo)本DNA,,凝膠電泳,,轉(zhuǎn)移至膜上,+ 病毒探針,,分析標(biāo)本中核酸情況,多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）：敏感度極高,標(biāo)本,提取核

41、酸,,DNA,+ 耐熱DNA多聚酶,,RNA,,轉(zhuǎn)錄,DNA,,,,DNA擴(kuò)增,,電泳,,基因片段觀察,,第五節(jié) 病毒感染的防治原則,一、病毒感染的治療,病毒,穿入,,,脫殼,,核酸復(fù)制、轉(zhuǎn)錄 及蛋白質(zhì)合成,,裝配,,吸附,釋放,,一、抗病毒藥物,1、設(shè)計策略： 以合成的異常嘧啶取代病毒DNA前體的胸腺嘧啶，病毒DNA合成時，異常嘧啶即參入到子代DNA中，阻止子代病毒基因結(jié)構(gòu)的合成和表達(dá)，從而抑制病毒的復(fù)制或復(fù)制出失去

42、感染性的病毒,,DNA,皰疹凈,無環(huán)鳥苷、丙氧鳥苷,常用藥物：,毒副作用大,,病毒特異性胸苷激酶磷酸化后才起作用,作為類似病毒核苷酸的底物與之競爭并抑制病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶,2、病毒蛋白酶的抑制物：,(1)設(shè)計策略： 以基因工程表達(dá)病毒蛋白酶后，取其結(jié)晶用X衍射及電腦模擬技術(shù)尋找酶的活性位點(diǎn)，然后設(shè)計出對蛋白酶活性位點(diǎn)的抑制劑。,(2)“雞尾酒”療法治療HIV： 3TC（核苷類藥物）+蛋白酶抑制劑,3、其他,生物制

43、劑：干擾素、干擾素誘生劑、IL-1、TNF等；中草藥：黃芪、板蘭根、大青葉等。,二、抗病毒基因治療,1、設(shè)計策略： DNA病毒：首先選擇病毒基因組的靶基因，然后設(shè)計互補(bǔ)的DNA片段（15-30個聚寡核苷酸），當(dāng)它與病毒的關(guān)鍵基因結(jié)合后，就可阻抑病毒核酸的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。 RNA病毒：主要通過與靶基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合后，一可阻礙mRNA與核糖體結(jié)合而阻抑病毒蛋白的轉(zhuǎn)譯；二則因反義RNA與mRNA結(jié)合物對核酸酶

44、敏感而被降解，間接阻斷病毒蛋白質(zhì)的合成。,2、存在問題： （1）合成反義DNA或RNA、核酶等所需成本高； （2）制劑不穩(wěn)定易被核酸酶降解及如何使制劑能有效地到達(dá)靶基因等。,三、免疫制劑： 1、抗病毒的特異免疫球蛋白； 2、治療性疫苗； 3、細(xì)胞因子等。,,病毒感染的預(yù)防,(二)滅活疫苗,(一)減毒活疫苗（首選）,(三)與人類病毒有交叉免疫原性的動物病毒（減毒活疫苗）,(四)基因工程疫苗：,

45、合成編碼保護(hù)性抗原的基因片段,,克隆表達(dá)于載體,細(xì)胞、真菌細(xì)菌等,,大量增殖,基因重組疫苗,,純化,,(五)核酸疫苗（DNA和RNA疫苗）： 由載體（質(zhì)粒DNA）和編碼病原體某種抗原的cDNA或mRNA組成。,細(xì)胞免疫體液免疫,,機(jī)體細(xì)胞,,細(xì)胞表達(dá)病毒抗原,,核酸疫苗,優(yōu)點(diǎn)：便于制備、儲存與運(yùn)輸，可誘生細(xì)胞免疫和體液免疫且維持時間長。,不足：效果不很穩(wěn)定，用于人體，需較極大劑量，且需考慮安全性。,其他類型疫苗

46、： 模擬病毒表位的合成肽疫苗、抗獨(dú)特型疫苗、表達(dá)多種抗原表位的聯(lián)合多價疫苗等。,被動免疫： 免疫血清、胎盤球蛋白、丙種球蛋白、轉(zhuǎn)移因子等。,,脊髓灰質(zhì)炎疫苗 減毒活疫苗（人二倍體細(xì)胞、Vero細(xì)胞）麻疹疫苗 減毒活疫苗（雞胚細(xì)胞）流行性腮腺炎疫苗 減毒活疫苗（雞胚細(xì)胞）風(fēng)疹疫苗 減毒活疫苗（人二倍

47、體細(xì)胞）甲型肝炎疫苗 減毒活疫苗（人二倍體細(xì)胞）人用狂犬病疫苗 滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）乙型腦炎疫苗 滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）森林腦炎疫苗 滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）乙型肝炎疫苗 基因工程疫苗（酵母菌表達(dá)）,,疫苗名稱 疫苗種類（培養(yǎng)細(xì)胞種類）,我國常見的病毒疫苗,重點(diǎn)內(nèi)容,病毒的