細(xì)菌分散儀應(yīng)用

1、細(xì)菌分散儀在結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷中的應(yīng)用體會(huì),檢 驗(yàn) 科 任 易,1. 結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷簡介,2. 結(jié)核分枝桿菌細(xì)菌學(xué)檢測,3. 傳統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)方法介紹,4.細(xì)菌分散儀的應(yīng)用評價(jià),5.細(xì)菌分散儀的原理及特點(diǎn),結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)簡介,,,1.結(jié)核抗體2.結(jié)核蛋白芯片3.體外r-干擾素試驗(yàn)4.結(jié)核桿菌分泌抗原,1.涂片2.培養(yǎng)3.藥敏4.菌型鑒定,細(xì)菌學(xué),免疫學(xué),分子生物學(xué),其 他,1.HPLC2.質(zhì)譜技術(shù)3.流式技術(shù),1.實(shí)

2、時(shí)熒光定量PCR2.DNA3.RNA4.耐藥基因突變5.菌型鑒定6.測序,結(jié)核分枝桿菌細(xì)菌學(xué)檢測,,,1.直接抹片法2.離心制片法,1.固體培養(yǎng)法2.液體培養(yǎng)法,1.羅氏比例法2.BD儀器法3.液體微量法,傳統(tǒng)方法----菌懸液的制備流程,吹打研磨棒磨菌瓶,目視比濁比濁儀分光光度計(jì),傳統(tǒng)方法----菌懸液制備的困擾,,,,,Better Way ？,分散效果及比濁結(jié)果受人為因素影響大，重現(xiàn)性低,開放容器易產(chǎn)生氣

3、溶膠,耗時(shí)、操作繁瑣,細(xì)菌分散儀的應(yīng)用,,完美替代傳統(tǒng)細(xì)菌分散方法 使菌懸液制備、定量一步到位！,BACspreaderTM1100,菌懸液制備過程比較,細(xì)菌分散儀應(yīng)用評價(jià),細(xì)菌分散效果,手工磨菌染色,分散儀菌懸液外觀,分散儀菌懸液染色,細(xì)菌分散儀應(yīng)用評價(jià),細(xì)菌分散儀對細(xì)菌活力的評價(jià),方法：分散儀制備1.0麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙海?分別稀釋成10-2mg/ml、10-4mg/ml菌液。 然后分別1、2、5分鐘繼續(xù)使用分散儀超聲分散，重

4、復(fù)以上過程。最后用22-SWG標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)分別取1滿環(huán)菌液用劃線法接種在中性羅氏培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)，觀察生長狀況，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。,細(xì)菌分散儀應(yīng)用評價(jià),細(xì)菌分散儀對細(xì)菌生物學(xué)活性（藥敏試驗(yàn)）的評價(jià),方法：進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)（比例法） 分別將手工磨菌和細(xì)菌超聲分散計(jì)數(shù)儀超聲分散至1.0mg/ml（即1.0麥?zhǔn)蠞岫龋┑木鷳乙合♂屩?0-2mg/ml和10-4mg/ml，參照《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》。用22SWG標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)分別沾

5、取1滿環(huán)（即0.01ml）稀釋好的菌液，用劃線法均勻接種至對照及含藥培養(yǎng)基表面，注意使菌液盡可能分布于培養(yǎng)基斜面。最終接種菌量為10-4mg和10-6mg。接種完成后置于37℃溫箱中培養(yǎng)28天，觀察結(jié)果。,細(xì)菌分散儀應(yīng)用評價(jià),2015年12月至2016年6月期間，本實(shí)驗(yàn)室將細(xì)菌超聲分散計(jì)數(shù)儀用于136株結(jié)核分枝桿菌臨床菌株和30株國家質(zhì)控菌株的藥物敏感性試驗(yàn)，取得了很好的試驗(yàn)結(jié)果。藥敏試驗(yàn)結(jié)果參照《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行判讀。與

6、手工磨菌比濁、稀釋后接種的藥敏試驗(yàn)結(jié)果相比，兩種菌懸液制備方法的藥敏試驗(yàn)結(jié)果相同，無顯著差異。,試驗(yàn)結(jié)果,細(xì)菌分散儀的特點(diǎn),分散、比濁全過程在密閉容器中進(jìn)行，最大限度保證生物安全性；分散、比濁及稀釋在同一支管中完成，減少移液次數(shù)，最大限度減少污染源；,儀器自動(dòng)超聲分散，自動(dòng)比濁，自動(dòng)折算稀釋體積，從取菌到配成標(biāo)準(zhǔn)菌懸液僅需3步，菌懸液制備快捷方便；,與傳統(tǒng)方法相比，超聲分散更均勻，降低細(xì)菌數(shù)量導(dǎo)致的誤差；5秒自動(dòng)讀取濁度數(shù)據(jù)，避免時(shí)

7、間性誤差；全自動(dòng)完成，避免人為誤差，重現(xiàn)性更高；,標(biāo)準(zhǔn)化,,高效,,安全,,,,細(xì)菌分散儀的工作原理,超聲波產(chǎn)生,空化作用,細(xì)菌分散儀的工作原理,在超聲波作用下，試管中的微小氣泡核產(chǎn)生振動(dòng)，當(dāng)聲壓達(dá)到一定值時(shí)，氣泡將迅速膨脹，然后突然閉合，在氣泡閉合時(shí)產(chǎn)生沖擊波。利用這種超聲空化作用，完成對結(jié)團(tuán)性細(xì)菌的分散。,利用90度散射光特性，即不論激光波長和待檢測細(xì)菌直徑大小關(guān)系如何，在菌液濃度一定時(shí)，90度方向上散射光強(qiáng)度保持恒定。再利用光傳

8、感器把光信號轉(zhuǎn)化為電信號，最終結(jié)果以菌液濃度呈現(xiàn)。,細(xì)菌分散儀的定量標(biāo)準(zhǔn),儀器配套的濁度標(biāo)準(zhǔn)液來源于中國計(jì)量科學(xué)研究院，并申明本系列標(biāo)準(zhǔn)溶液嚴(yán)格按照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）的規(guī)定和國際上公認(rèn)的配制方法制備成麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)溶液，并將量值傳遞到細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)溶液。通過使用滿足計(jì)量學(xué)特性要求的制備方法和計(jì)量器具，保證標(biāo)準(zhǔn)溶液量值的溯源性。,準(zhǔn)確度：相對誤差≤10%；精密度：相對標(biāo)準(zhǔn)偏差≤5%,濁度溯源：,儀器精準(zhǔn)度：,,,細(xì)菌

9、分散儀的應(yīng)用前景,分枝桿菌等微生物藥敏實(shí)驗(yàn)的菌懸液制備,水處理、固液分散、溶液中顆粒的解團(tuán)聚實(shí)驗(yàn),生物制品研發(fā)及細(xì)菌培養(yǎng)的菌落分散及濁度檢測實(shí)驗(yàn),可用于各省市疾控中心結(jié)防所、結(jié)核病定點(diǎn)醫(yī)院、科研機(jī)構(gòu)、生物公司等,超聲分散法----痰液前處理？？？,,,,體必康集團(tuán),體必康，為結(jié)核病科學(xué)創(chuàng)新領(lǐng)航！,TB Healthcare ，Leading the Way in Scientific&#

10、160;Innovation for TB！,,體必康集團(tuán),體必康簡介,,廣東體必康生物科技有限公司，以”為結(jié)核病科學(xué)創(chuàng)新領(lǐng)航“為集團(tuán)發(fā)展的源動(dòng)力，立志為結(jié)核病的創(chuàng)新提供系統(tǒng)的解決方案。 將科研團(tuán)隊(duì)在結(jié)核病領(lǐng)域十余年的研究積累成果進(jìn)行轉(zhuǎn)化。體必康基于研發(fā)和平臺(tái)積累了大量的核心技術(shù)，目前共申請專利28項(xiàng)，其中發(fā)明專利17項(xiàng)、實(shí)用新型專利7項(xiàng)、外觀專利4項(xiàng)；授權(quán)專利發(fā)明授權(quán)3項(xiàng)、實(shí)用新型專利5項(xiàng)、外觀專利授權(quán)4

11、項(xiàng)；另有兩項(xiàng)國際PCT專利在申請中,團(tuán)隊(duì)組成,研發(fā)團(tuán)隊(duì)以中國科學(xué)院生物物理研究所的院士和資深科學(xué)家為核心、青年學(xué)術(shù)帶頭人為主體、組成了多學(xué)科交融的老中青結(jié)合的強(qiáng)有力研究團(tuán)隊(duì)，員工中博士占28%，碩士占24%，學(xué)士占32%。,,旗下,,旗下,廣州博翀生物科技有限公司進(jìn)行生物芯片產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)和市場營銷工作，在廣州科學(xué)城，有800平米的研發(fā)生產(chǎn)和辦公場地。,,,,,公司介紹,廣東希格生物科技有限公司1200平米的GMP生產(chǎn)車間，從事醫(yī)療器