血液分析儀臨床應用

1、血液分析儀臨床應用,客戶技術服務部吳子權,第一部分 血液學基礎,1.血液流經(jīng)全身各臟器，是人體最大的循環(huán)系統(tǒng)；2 .為全身提供氧氣和營養(yǎng)成分；3.帶走二氧化碳和代謝產(chǎn)物4.有動脈和靜脈之分,血液成分,,,EDTA-K2抗凝血血漿55%水 90%養(yǎng)分蛋白質激素……細胞45%紅細胞白細胞 血小板,紅細胞,1.紅細胞為雙凹圓盤狀；2.內(nèi)含血紅蛋白；3.為機體組織攜帶

2、氧氣和養(yǎng)分；4.正常男性為：4.0-5.5×1012/L 女性為：3.5-5.0×1012/L細胞膜有脆性，易破碎，因而溶血劑（表面活性劑）可溶解紅細胞,血紅蛋白,1.血紅蛋白為紅細胞內(nèi)部結構，具有攜帶氧氣的位點；2.其功能為攜帶氧氣；3. 當紅細胞被溶解后，血紅蛋白釋放出；4.正常人含量為： 110-170 g/L血紅蛋白有粘性，容易附著,血小板,血

3、小板功能為參與止血正常參考為： 100-300 ×109/L 血小板由于本身的功能特性，容易受到刺激后聚集，因而在臨床檢測中最容易受影響,,血小板,白細胞,功能為抵抗機體免受感染正常參考為：4-10×109/L可分為5個亞群，各自行使獨立的功能具有細胞核，,,白細胞,白細胞亞群,1.中性粒細胞2.淋巴細胞3.單核細胞4.嗜酸細胞5.嗜堿細胞,,1,,2,,3,,4,,5,庫爾特

4、原理,負壓,血細胞懸液,外電極,內(nèi)電極,小孔,小孔管,小孔電流,樣品杯,小孔近觀,庫爾特原理三要素：小孔、負壓、電極檢測：細胞大小和數(shù)量,第二部分 血細胞直方圖,在小孔計數(shù)時儀器獲得細胞的數(shù)量和大小(體積)的信息,再進一步分類整理,得到在各種不同體積下相應的數(shù)量,反應在坐標上坐標橫軸表示細胞大小,以fl(飛升)為單位坐標縱軸表示相應數(shù)量,三分類之白細胞直方圖,紅細胞直方圖,典型的紅細胞直方圖上，可以看到兩個細胞群體：1．細

5、胞主群 從50 fL開始，兩側對稱呈正態(tài)分布的曲線， 又稱“主峰” 2．大細胞群 在主群右側，又稱“足趾部”，是一些紅細胞二聚體、三聚體、多聚體的混合物。,血小板直方圖（擬合曲線）,,在血小板的直方圖上可見兩條曲線：一條是 2fl-20fl 的原始數(shù)據(jù)曲線;另一條是 0fl-70fl 的擬合曲線.,擬合曲線,血小板計數(shù)的干擾主要來自:2 fl以下：噪音、電磁波的干擾20 fl以上：裂紅細胞;小紅細胞;白細胞的干擾

6、,擬合曲線作用,儀器根據(jù)測量得到的2～20 fL范圍內(nèi)血小板分布情況，按照對數(shù)正態(tài)分布規(guī)律得到0～70 fL范圍血小板分布情況（正常人血小板絕大多數(shù)分布在2～20 fL 范圍內(nèi)）。如果擬合成功，血小板數(shù)量由擬合曲線下的面積換算得到，即0～70 fL范圍的血小板數(shù)量；如果擬合不成功，沒有擬合曲線，血小板結果只報告2～20fL范圍的血小板數(shù)量。通常情況下是低于實際數(shù)量的,血小板曲線不擬合的原因,1.血小板原始計數(shù)小于20 

7、5;109/L；2.血小板曲線不呈現(xiàn)對數(shù)正態(tài)分布；3. 血小板曲線的波峰不在3fL-15fL之間；4.血小板PDW大于20%5.三次計數(shù)中任何一次沒有符合上述4點擬合條件,第三部分 血細胞五分類,庫爾特VCS五分類技術 V：體積分析 C：細胞核型分析 S：細胞內(nèi)部顆粒分析,接近原態(tài)的白細胞分析,Scatter Pak雙試劑系統(tǒng)的作用E-lyse: 通過低滲作用溶解紅細胞；S-lyse: 終止溶解作用

8、，使白細胞恢復到接近原態(tài),接近原態(tài)的WBC分析,接近原態(tài)的白細胞,,,進入流式通道,逐個、同時、直接的三維檢測,NEDC Mean,細胞的三維定位,NEOP Mean,NE RLS Mean,細胞的三維定位,細胞的三維定位,三維空間的多側面表示-DF1 -體積(V),激光散射(S),,,,,,嗜酸細胞,中性粒細胞,淋巴細胞,單核細胞,DF2 -體積(V),傳導性(C),,,,,單核

9、細胞,淋巴細胞,中性粒細胞嗜酸細胞嗜堿細胞,網(wǎng)織紅細胞的檢測,網(wǎng)織紅細胞是介于晚幼紅細胞和成熟紅細胞之間的不成熟紅細胞,通常較成熟紅細胞稍大,其胞質中尚殘存部分嗜堿性物質(RNA,核糖體),經(jīng)堿性染料染色后可見深染的網(wǎng)狀結構,故名。右圖中標記A、B、C的細胞分別代表不同成熟度的網(wǎng)織紅細胞的。,新亞甲藍-VCS檢測法,以經(jīng)典的超活染料新亞甲藍（NMB）著色網(wǎng)織紅細胞內(nèi)殘存的RNA漂洗紅細胞內(nèi)血紅蛋白(酸性試劑)用VCS三維技術，

10、檢測網(wǎng)織紅細胞,網(wǎng)織紅細胞VCS三維散點圖分析,網(wǎng)織紅細胞檢測注意點,使用抗凝血，樣本采集后8小時內(nèi)完成檢測加入染液（A液）后室溫下作用5-60分鐘取2ul，加入2ml漂洗液（B液）后勿混勻，等待30秒鐘30秒鐘一到，立即進樣檢測網(wǎng)織紅細胞檢測的重復性不太理想（半自動）,第四部分 血細胞參數(shù)介紹,WBC、NE%、NE#、LY%、LY#、MO%、MO#、EO%、EO#、BA%、BA#；RBC、Hgb、Hct、MCV、MCH、

11、MCHC、RDWPLT、MPV、PCT、PDWRET%、RET#、MRV、MI,白細胞系列參數(shù),WBC：白細胞數(shù)量，正常人參考為4-10 ×109/LNE%：中性粒細胞百分比，正常參考為50%-75%NE#：中性粒細胞絕對值LY%：淋巴細胞百分比，正常參考為20%-40%LY#： 淋巴細胞絕對值MO%：單核細胞百分比，正常參考為3%-10%MO#：單核細胞絕對值EO%：嗜酸細胞百分比，正常參考為0.5%-5%

12、EO#：嗜酸細胞絕對值BA%：嗜堿細胞百分比，正常參考為0-2%BA#：嗜堿細胞絕對值,紅細胞系列參數(shù),RBC：紅細胞數(shù)量，正常參考男性為4.0-5.5 ×1012/L 正常參考女性為3.5-5.0 ×1012/LHgb：外周血中血紅蛋白濃度，正常參考為110-160 g/LHct：血細胞壓積，也可指紅細胞壓積，正常參考為0.35-

13、0.50MCV：平均紅細胞體積，正常參考為80-100 fLMCH：平均紅細胞血紅蛋白含量，指平均每個紅細胞含的血紅蛋白量，正常參考為27-34 pgMCHC：平均紅細胞血紅蛋白濃度，指紅細胞中血紅蛋白濃度，正常參考為320-360 g/LRDW：紅細胞分布寬度，正常參考為11.5% - 15%,血小板系列參數(shù),PLT：血小板數(shù)量，正常參考為100-300 ×109/LMPV：平均血小板體積，正常參考為6.5-12.

14、5fLPct：血小板壓積，正常參考為0.108%-0.271%PDW：血小板分布寬度，正常參考為11 .5%-18%,網(wǎng)織紅細胞系列參數(shù),RET%：網(wǎng)織紅細胞百分比，正常參考為0.5%-2.5%RET#：網(wǎng)織紅細胞絕對值MRV：平均網(wǎng)織紅細胞體積，正常參考為100-125fLMI：網(wǎng)織紅細胞不成熟度，即不成熟網(wǎng)織紅細胞占所有網(wǎng)織紅細胞的比率，正常參考為0.2-0.4,第五部分 HMX常見的旗標和代碼,旗標(數(shù)值后):R

15、 結果需復核*R 計數(shù)受干擾H 結果高于參考范 圍上限L 結果低于參考 范圍下限,代碼(替代數(shù)值):----- 三次計數(shù)比統(tǒng)一….. 不完全計算+++++ 結果超出操作范圍::::: 流式通道堵塞????? 數(shù)據(jù)無效,白細胞計數(shù)值后出現(xiàn) *R的臨床意義,說明白細胞在35fl處的檢測受到干擾.在白細胞計數(shù)孔有35fl大小的顆

16、粒通過并被當作白細胞計數(shù),且超過一定數(shù)量,觸發(fā)報警在白細胞直方圖上看,曲線在35fl處上抬,正常情況,異常情況,導致 *R出現(xiàn)的可能原因,小白細胞有核紅細胞、抗溶紅細胞紅細胞聚集,大血小板,血小板聚集溶血劑輸送系統(tǒng)故障,RDW后出現(xiàn) R 的臨床意義,紅細胞計數(shù)時儀器計數(shù) 24fl～ 360fl的顆粒,繪出直方圖,正常紅細胞直方圖應為兩端封閉、單峰、呈高斯分布的曲線.RDW反應紅細胞大小分布的偏離情況,其意義相當于 CV%(變異系

17、數(shù)).,導致的原因：輸血紅細胞凝集紅細胞碎片大血小板血小板凝集成塊處理方法：涂片鏡檢紅細胞是否大小不一,,PLT結果后出現(xiàn) R旗標的臨床意義,儀器進行血小板計數(shù)時,計數(shù) 2fl～ 20fl的血小板數(shù)量,再擬合出一條 0fl～ 70fl的曲線,目的是為了排除計數(shù)干擾.但條件不滿足時儀器不能給出擬合曲線,這時候血小板數(shù)值后出現(xiàn) R .,,導致血小板后出現(xiàn) R 的原因,小紅細胞或紅細胞碎片;白細胞碎片;大血小板,血小板凝集

18、;血小板大小不一(輸血后);電磁波或噪音干擾小孔計數(shù),處理方法,1.手工涂片鏡檢,如發(fā)現(xiàn)小紅細胞,細胞碎片等異常細胞,則手工計數(shù)血小板;2.如果大血小板影響到白細胞或紅細胞數(shù)值,重新復核;3.如果出現(xiàn)衛(wèi)星血小板,將標本以枸櫞酸鈉抗凝,檢測血小板數(shù)值,但最終數(shù)值須乘以1.1(10%稀釋比例).,+++++ 出現(xiàn)的臨床意義,+++++ (代碼) ：結果超出儀器的操作范圍 對白細胞而言計數(shù)值大于 99.9×109/L；

19、 對紅細胞而言計數(shù)值大于7.00×1012/L ； 對血小板而言計數(shù)值大于 999×109/L.處理方法：用ISOTON III液稀釋標本至線性范圍內(nèi)再測 注: 1.先做一空白循環(huán)以防止攜帶污染 2.不能報告白細胞分類結果檢查儀器稀釋液和溶血劑輸送系統(tǒng)有無故障,代碼 ----- 出現(xiàn)的臨床意義,----- 出現(xiàn)代表三次計數(shù)不統(tǒng)一可能導致的原因：小孔堵塞或部分堵塞;標本有凝塊或絲

20、狀纖維蛋白;白細胞聚集,紅細胞凝集;大血小板,血小板凝集;標本稀釋后未氣泡混勻.處理方法：參照維修手冊清洗小孔;查看標本有無凝塊,涂片鏡檢有無細胞聚集;檢測標本混勻系統(tǒng).,,代碼 ….. 出現(xiàn)的臨床意義,….. 出現(xiàn)表示數(shù)據(jù)不完整,不完全計數(shù)通常當一個參數(shù)由于三次計數(shù)不統(tǒng)一或超過范圍得不到確切數(shù)值時,其衍生參數(shù)后將出現(xiàn) …… , 如WBC +++++ ,則其衍生參數(shù)NE#、 LY #、 MO #、 EO #、 BA #

21、 后將出現(xiàn) …..,,….. 也可表示吸樣錯誤,….. 出現(xiàn)也可表示吸樣錯誤,當發(fā)生吸樣錯誤時,所有參數(shù)的結果后都會帶有 ….. 導致的可能原因有：樣本有凝塊,堵塞吸樣針;樣本量不夠;樣本的RBC和HGB濃度過低(嚴重貧血病人標本),血樣探測器檢測失敗;儀器吸樣系統(tǒng)堵塞.,發(fā)生吸樣錯誤的處理方法,1.查看樣本有無凝塊,如果有重取標本,沒有則重新檢測,再出現(xiàn)如上問題則涂片鏡檢有無凝塊或細胞聚集;2.檢測標本量是否夠;3.對

22、于嚴重貧血病人樣本采用手動進樣方式.4.檢測儀器吸樣系統(tǒng),如發(fā)生堵塞則清洗.,代碼 ::::: 出現(xiàn)的臨床意義,在白細胞五項分類及網(wǎng)織紅細胞計數(shù)中,當流式通道堵塞產(chǎn)生 ::::: 代碼.在散點分布圖上可有三種堵塞報警：- FC ,流式通道完全堵塞(無檢測);- PC1 ,流式通道檢測時間延長;- PC2 ,流式通道檢測時間縮短.,,,,導致 PC / ::::: 的原因,- FC ：完全堵塞;- PC1 ：流式通道或標本通

23、道部分堵塞導致分類時間延長;- PC2 ：紅細胞未完全溶解導致分類時間縮短,或鞘液系統(tǒng)問題.臨床上高膽固醇和高甘油三酯血癥、血紅蛋白病、藥物治療后、進行性肝病等都可導致 PC2.,出現(xiàn)PC / :::::的處理方法,1.手工涂片進行白細胞分類;2.用乳膠和 5C質控清洗流式通道;3.查看ScatterPak液有否過期,檢查 ScatterPak 液輸送系統(tǒng)有無故障.,血常規(guī)樣本的制備抗凝劑的使用問題長期放置對分類的影響樣本

24、本身的干擾問題檢測溫度的影響,第六部分 臨床應用問題探討,血常規(guī)樣本的制備,靜脈采血、并立即和抗凝劑充分混勻抗凝劑濃度必須適宜試管必須潔凈，最好為一次性真空采血管通常樣本采集后24小時內(nèi)完成常規(guī)檢測做網(wǎng)織紅細胞檢測必須在8小時內(nèi)完成樣本必須室溫下放置,抗凝劑的使用問題,抗凝劑推薦使用EDTA-K2或Na2抗凝劑濃度為15g/dL，取20ul可抗凝1.5-2.0ml靜脈血血細胞遇到抗凝劑會出現(xiàn)短時間的收縮，再逐漸平衡，恢

25、復原來大小，通常這一時間為幾分鐘，極少數(shù)樣本需要幾十分鐘如果抗凝劑濃度過高，將使平衡時間延長，影響檢測,樣本長期靜置對分類的影響,標本靜立3~4小時以上標本靜立導致細胞分層，產(chǎn)生特殊微環(huán)境重新混合后細胞需重建平衡，通常需要30分鐘糾正的方法：間隔性混勻30分鐘后再測,樣本本身的干擾問題（I）,一.細胞聚集紅細胞聚集：常見于溫度低時患者血樣發(fā)生自身冷凝集，通常將血樣37攝氏度溫育15分鐘后再檢測，可消除血小板聚集：常見于采血

26、不順利、抗凝不充分、試管質量差二.低能量白細胞 指衰老或生理異常白細胞，這些白細胞在經(jīng)歷E-lyse和S-lyse作用后通常不能或不能很快恢復到原態(tài)，影響分類,樣本本身的干擾問題（II）,三.藥物、激素影響的樣本如長期化學藥物治療、孕婦等四.一些特殊的不分類的樣本如肝病、慢性腎病、黃疸、新生兒等血樣本，將不分類，并報警PC2原因可能是紅細胞表面負電荷增多，對S-lyse溶血劑具有抵抗作用，導致不分類并報PC2處理方