地貧基因診斷f

1、地中海貧血基因,地中海貧血是一組單基因遺傳性溶血性疾病,我國(guó)?和β地貧基因突變類型頻率,Zhang J, et al. Hemoglobin. 2012 Sep 3.,地中海貧血基因攜帶率,Xu, et al. J Clin Pathol 2004, 57:517-22. Cai, et al. Chi J Epidemiol 2002,23:281-5.Zhao, et al.Chi J Epidemiol 2011,32:352

2、-6.,α地貧基因分子基礎(chǔ),,,,,缺失型：常見（約占60%）,非缺失型：少見（約占40%）,α地貧基因分子基礎(chǔ),,,,α1 地貧（ α 0地貧）： 16號(hào)染色體兩個(gè)α基因喪失;一個(gè)缺失，另一個(gè)點(diǎn)突變。 - α / - α或α 地α / α 地α ，- - / α α。α2 地貧（ α+地貧）： 16號(hào)染色體一個(gè)α基因功能喪失。 - α / α α 或 α地α / α α。,,血紅蛋白H

3、病:由于α基因3個(gè)缺失/突變，使過量的β珠蛋白肽鏈形成β4多聚體（ HbH）胎兒水腫：4個(gè)α基因全部缺失/突變非缺失型α地貧,α地貧基因分子基礎(chǔ),我國(guó)非缺失型? 地貧常見基因類型： ?2 CD 30 ? GAG (?Glu) Unstable Hb ?2 CD 31 AGG?AAG (Arg?Lys) Splicing m

4、utation ?2 CD 59 GGC?GAC (Gly?Asp) Unstable Hb Hb Westmead ?2 CD 122 CAC?CAG (His?Gln) Unstable Hb Hb QS ?2 CD 125 CTG?CCG (Leu?Pro) Unstable Hb

5、 Hb CS ?2 CD 142 TAA?CAA (Gln) Terminator mutation,α地貧基因分子基礎(chǔ),α 地貧臨床類型與基因類型的關(guān)系,,,,臨床 基因靜止型 - α / αα輕型 - α / - α或- - / α α中間型

6、 - - / - α 重型 - - / - -,,,,,β地貧基因分子基礎(chǔ),,基因缺失：少見(僅見于:41-42),點(diǎn)突變：常見（約占99.5%）,β地貧基因分子基礎(chǔ),β 地貧臨床類型與基因類型的關(guān)系,,,,臨床 基因輕型 β地/ β（ β雜合子）中間型 β地/

7、 β地（ β變異型純合子或雙重雜合子）重型 β地/ β地（ β純合子或雙重雜合子）,,,,,地中海貧血基因診斷技術(shù),PCR：多重PCR，Gap-PCR，QR-PCR等位基因特異性性寡核苷酸雜交（ASO）反向點(diǎn)雜交 （RDB）Southern blot 限制性切酶譜分析多重連接酶依賴探針擴(kuò)增技術(shù)(MLPA)多重引物延伸DHPLC基因測(cè)序,Genotyping of the--SEA alleles

8、by Gap-PCR,地貧基因診斷技術(shù)（Gap-PCR）,地貧基因診斷技術(shù)（ASO）,地貧基因診斷技術(shù)（ASO）,地貧基因診斷技術(shù)（RDB）,,GenotypeFather CDs41-42 (?CTTT) / N MotherIVS-2-654 (C?T) / N FetusCDs41-42 / IVS-2-654Normal control N / N,地貧基因診斷技術(shù)（RDB）,地貧基因診斷技術(shù)（MLPA）

9、,地貧基因診斷技術(shù)（DHPLC),α地貧 (缺失型)的基因診斷,,,,,Southern 印跡結(jié)合 多重PCR結(jié)合 缺口PCR(Gap-PCR ) 多重連接酶依賴探針 實(shí)時(shí)熒光定量 限制性切酶譜分析 溶解曲線分析 結(jié)合片段大小分析 擴(kuò)增技術(shù)(MLPA) PCR(RQ-PCR)

10、 優(yōu)點(diǎn) 可用于分析基因的 簡(jiǎn)潔，快速，污 對(duì)儀器要求低，易推 重復(fù)性好，特異性高 確定cDNA拷貝 大片段缺失與重復(fù) 染降低，檢測(cè)單 廣，檢測(cè)大片段缺失。 ，可同時(shí)檢測(cè)已知與 數(shù)，可同時(shí)檢 突變，結(jié)果可靠， 個(gè)堿基突變及小

11、 未知大片段缺失或重 測(cè)已知和未知 穩(wěn)定性高。 片段缺失。 復(fù)突變。 大片段缺失缺點(diǎn) 費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、需用

12、 不能檢測(cè)未知缺失及 成本高限制了其推廣 放射性同位素。 非缺失突變。應(yīng)用 PCR 診斷方法的 可鑒定各種缺失 廣泛用于地貧檢測(cè)， 作為常見地貧基因篩 作為補(bǔ)充實(shí)驗(yàn) 補(bǔ)充或佐證。

13、 類型。 可區(qū)分雜合子及純 陰性但高度懷疑地貧 或產(chǎn)前篩查 合子 的補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。,,,,,各種α地貧基因診斷方法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用,α地貧(非缺失型)的基

14、因診斷,PCR 結(jié)合限制性內(nèi)切酶酶譜分析：簡(jiǎn)便、快捷，但只限于涉及限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)改變的突變和小片段缺失的檢測(cè)多重?cái)U(kuò)增不應(yīng)突變系統(tǒng)：簡(jiǎn)便、快速，同Gap-PCR一樣，廣泛用于α地貧基因檢測(cè)聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)合寡核苷酸探針的反向斑點(diǎn)雜交:診斷效率高，廣泛用于常見非缺失型基因檢測(cè) 基因芯片：并行性、多樣性及自動(dòng)化，同時(shí)診斷α及β地貧 基因測(cè)序：可用于檢測(cè)未知的非缺失型地貧基因,β地貧基因診斷,點(diǎn)突變,,PCR-RDB基因測(cè)序

15、,,植入前基因診斷 （羊膜穿刺取樣） 母體外周血分離胎兒細(xì)胞進(jìn)行產(chǎn)前診斷 母體血漿或血清中胎兒DNA分析,地貧基因產(chǎn)前診斷新技術(shù),地貧基因診斷臨床應(yīng)用,評(píng)價(jià)基因診斷結(jié)果應(yīng)注意的問題,不同種族/地區(qū)地貧基因突變點(diǎn)有差別臨床貧血的嚴(yán)重程度（即臨床分型）與基因診斷的嚴(yán)重程度一致：確診,評(píng)價(jià)基因診斷結(jié)果應(yīng)注意的問題,臨床貧血嚴(yán)重程度與基因診斷不一致（1）臨床“重”，基因“輕”： ①應(yīng)作家系調(diào)