串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在新生兒篩查上的應(yīng)用

1、串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù) 在新生兒篩查方面的應(yīng)用,新生兒篩查的必要性,? 遺傳代謝病多是罕見病，種類繁多，約4000種，常見的500種以上，單一病種發(fā)病率低, 總體發(fā)病率1/3000-5000? 新生兒篩查： 及早治療可預(yù)防疾病的發(fā)作，減輕癥狀提高患兒生存質(zhì)量，減少傷殘? 產(chǎn)前診斷： 預(yù)防殘疾兒童的出生，提高出生人口素質(zhì)? 臨床篩查及診斷：明確診斷，減輕癥狀，挽救生命，減少醫(yī)療糾紛,串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)勢,

2、? 特異性：檢測分子量，內(nèi)標(biāo)定量顯著降低假陽性率? 敏感性：明顯降低假陰性率? 高通量：一次可以檢測幾十種小分子物質(zhì)（ 30-50多種疾?。?，一臺儀器每天檢測500～600個樣品，每個標(biāo)本2-3分鐘? 采血簡單，可以寄送,串聯(lián)質(zhì)譜能篩查哪些疾病,? 氨基酸—氨基酸障礙疾病? ?；鈮A—有機(jī)酸及脂肪酸代謝障礙疾病? 溶酶體病及腦白質(zhì)營養(yǎng)不良? SCID（重癥聯(lián)合免疫缺陷）比較成熟? 臨床應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大? 半

3、乳糖血癥、糖原累積癥、 Wilson病及線粒體腦肌病等等不能篩查,測定方法,目前使用 LCMSMS 技術(shù)主要檢測的氨基酸及?；鈮A，可分別作為氨基酸代謝異常、脂肪酸代謝異常和有機(jī)酸代謝異常等疾病的判斷指征,前處理方法一般 LCMSMS 新生兒篩查血片的前處理方法可根據(jù)是否進(jìn)行衍生化反應(yīng)分為衍生化法和非衍生化法兩大類，兩種前處理方法在各實驗室或檢測機(jī)構(gòu)均有使用，具體操作細(xì)節(jié)可能有所不同，其大致流程如下

4、 衍生化法,原材料采購與初加工部門,生產(chǎn)產(chǎn)品的車間,動力供應(yīng)部門,4,2,3,非衍生化法,衍生化法比較精確，但步驟繁瑣，且目標(biāo)化合物易分解；非衍生化法步驟簡單，成本低，適合檢測大量樣本，但不夠精確。,液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的檢測原理,新生兒串聯(lián)質(zhì)譜篩查使用四極桿質(zhì)譜，該類串聯(lián)質(zhì)譜由四極桿質(zhì)量分析器、碰撞室、四極桿質(zhì)量分析器組成。待測化合物離子化后產(chǎn)生

5、相應(yīng)前體離子，前體離子經(jīng)碰撞室發(fā)生誘導(dǎo)碰撞解離產(chǎn)生產(chǎn)物離子碎片，導(dǎo)入檢測器產(chǎn)生強(qiáng)度信號。,LC-MS/MS檢測到的離子流圖,島津液相串聯(lián)質(zhì)譜,島津公司針對新生兒篩查工作專門開發(fā)了Neonatal Solution新生兒篩查軟件，配合強(qiáng)大的LabSolutions工作站，為新生兒篩查工作提供完整的方法建立、數(shù)據(jù)采集、數(shù)據(jù)分析及自動準(zhǔn)確度管理工具，可便捷、高效處理、分析、管理大批量新生兒篩查數(shù)據(jù)。,經(jīng)過Neonatal Solution的處

6、理，自動得到各組分的計算結(jié)果，根據(jù)預(yù)設(shè)的限值，自動使用各種顏色標(biāo)注超出限值的結(jié)果。,利用MALDI-TOF-MS檢測嬰兒遺傳疾病,利用飛行時間質(zhì)譜檢測基因是近年來的新技術(shù)，它對某些基因突變型遺傳疾病檢出率較高，與傳統(tǒng) 常用基因檢測方法相比 ，具有檢測位點多 、覆蓋率高 、高通量等特點 ，能夠滿 足臨床要求 ，為患兒未來的婚育 、用藥及提早干預(yù)提供了積極有效的遺傳指導(dǎo)意義。,什么是MALDI-TOF-MS,MALDI-TOF-MSMat

7、rix-Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry 基質(zhì)輔助 激光 解吸電離 飛行時間 質(zhì)譜,這項技術(shù)是由是由島津制作所的田中耕一先生和美國科學(xué)家約翰·芬恩一起發(fā)明的，二人也因此項發(fā)明贏得了2002年的諾貝爾化學(xué)獎,原 理,,sample plate,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,sample

8、 plate,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Laser,,sample plate,+,+,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,MALDI與其他的電離方式不同，樣本在基質(zhì)的保護(hù)下幾乎不受傷害?；|(zhì)在激光的照射下吸收了激光的能量，電離氣化，樣本接受了基質(zhì)電離放出的質(zhì)子從而帶電，這樣樣本分子在基質(zhì)氣相的包裹下，進(jìn)入下一步驟。使用MALDI電離出的生物大分子是真正“活”著的生物大分子。,應(yīng) 用,因MALTI-TOF

9、-MS具有的檢測位點多 、覆蓋率高 、高通量等特點 ，無錫市婦幼保健醫(yī)院已經(jīng)為新生兒篩查應(yīng)用此技術(shù)做出了試驗。醫(yī)院選擇了 2796 例新生兒為研究對象 ， 采集足跟血并 提取基 因組 D N A ，針對 中國人群特 點 ，進(jìn)行 4 個基 因( GJB2 ， C JB3 ， SLC26A 4和 12s rR N A ) 20 個 突變位點 的基 因突變檢測 ，先通過PCR擴(kuò)增出目的基因片段，然后通過飛行時間質(zhì)譜檢測，檢 出耳聾基

10、因突變新生兒 158 例 ， 攜帶率為 5． 65％ 。由此可證明M A LDI—TO F—M S 對非綜合征型耳聾患者的突變 檢 出率 較高 。,雖然該技術(shù)具有高效 、快速、判讀簡易和準(zhǔn)確性高的檢測特點，有望成為一種極具潛力 的耳聾基因診斷和篩查工具 ，但成本相對較高 ，且不能檢測到其他未知突變 ，所以有所局限，但在其他領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用，如質(zhì)量檢測方向的蛋白、肽鏈的檢測，還有DNA探針、引物的鑒定，檢測。,引用文章,無錫地 區(qū)新生兒耳聾