坐骨神經(jīng)腓腸肌標本制備

1、坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本制備 Preparation of Sciatic Nerve-Gastrocnemius Muscle Specimen,談智tanzhi@mail.sysu.edu.cnDepartment of Physiology,生理學(xué)實驗課的目的Purpose of this Course,驗證和鞏固生理學(xué)的基本理論了解獲得生理學(xué)知識的科學(xué)方法掌握生理學(xué)實驗的基本操作技術(shù)培養(yǎng)嚴肅的態(tài)度、嚴格的要求、嚴密的方

2、法培養(yǎng)對事物觀察、分析、綜合的能力，獨立思考解決問題的能力以及創(chuàng)新的精神和創(chuàng)新的能力,實驗課的要求Requirements of this Course,實驗前: 預(yù)習(xí)教材并積極思考實驗中：仔細觀察并動手操作；愛護儀器器械和實驗動物 實驗后：保持衛(wèi)生清潔，寫好實驗報告并可進入論壇討論,實驗報告的一般格式The Format of Experimental Reports,姓名、班級、組別 (Name, class &

3、 group)實驗題目、日期 (Title & Date)實驗?zāi)康?、原?(Purpose & Principle) 實驗對象 (Subject)實驗器材和實驗方法 (Materials & Methods)實驗結(jié)果 (Results)討論 (Discussion)結(jié)論 (Conclusion),撰寫實驗報告或在以后的科研論文中如何區(qū)分結(jié)果、討論、結(jié)論：

4、 1、結(jié)果:結(jié)果是實驗產(chǎn)生的純客觀的描述，多以圖表、數(shù)據(jù)形式進行表述。 2、討論:①對實驗結(jié)果進行理論上的分析和論證②對本實驗研究方法的科學(xué)性和局限性的探討③提出可供深入研究的問題，或本實驗尚待進一步解決的問題④對未來研究及如何推廣研究提出建議。,3、結(jié)論：結(jié)論呈現(xiàn)的是研究中的客觀事實，應(yīng)是基本肯定的，也可以是否定的，并可以在相同背景下重復(fù)出現(xiàn)；它是對研究工作的一個小結(jié)，交代所研究的問題，所獲得的結(jié)論以及解決問題所達到的程度，

5、還可以對今后的研究指出方向，提出新的課題。,坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本制備 Preparation of Sciatic Nerve - Gastrocnemius Muscle Specimen,1、熟悉并掌握蟾蜍或蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標本的制備方法2、熟悉并掌握生理學(xué)實驗常用器械的使用和基本操作技術(shù),實驗?zāi)康?(Purpose),實驗原理 (Principle),,,,①為什么要做這個實驗？,在生理學(xué)實驗中常利用蛙的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本研

6、究神經(jīng)、肌肉的興奮、興奮性；刺激與反應(yīng)的規(guī)律和肌肉收縮的特征等，制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標本是生理學(xué)實驗的一項基本操作技術(shù)。,②為什么實驗動物選蟾蜍？,兩棲動物一些基本生命活動和生理機能與溫血動物近似，而其離體組織、器官保持活性所需的條件比較簡單，易于控制和掌握，所以生理實驗中常選擇蟾蜍或青蛙的離體組織或器官作為實驗標本。,③怎樣保持離體器官的活性？,任氏液是—種比較接近兩棲動物內(nèi)環(huán)境的液體，可以用來延長青蛙心臟在體外跳動時間、保持兩棲類其他

7、離體組織器官生理活性等,實驗對象 (Subject):  蟾蜍或蛙 Toad or Frog,實驗藥品(Drug):任氏液(Ringer's solution),原 液 成 分 :20%NaCl(ml) 32.5 10%KCl(ml) 1.4 10%CaCl2(ml) 1.25%NaHCO3(ml) 4.0 1% NaH2PO4(ml) 1.0　C6H12O6(g) 2.0

8、 (可不加,為什么？) H2O加至(ml) 1000,實驗器械 (Tools),毀髓針：用于破壞蛙的腦和脊髓，怎么破壞？-視頻剪刀：普通剪刀用于剪皮膚、肌肉和骨等粗硬組織；細剪刀或眼科剪刀用于剪神經(jīng)血管和心包膜等細軟組織；禁用眼科剪刀剪皮膚、肌肉或其他粗硬物 鑷子：圓頭鑷子對組織損傷較小，用于夾捏組織和牽提切口；有齒鑷子用于夾捏骨頭和剝脫蛙皮；眼科鑷子有直彎兩種，用于分離神經(jīng)、血管和夾捏細軟組織，切不可用鑷子直接夾捏或牽提

9、神經(jīng)血管，為什么？,玻璃分針：用于分離血管神經(jīng)等組織，不可用力過猛以防折斷蛙板：用于固定蛙類，以便進行解剖和實驗鋅銅弓：用于對標本施加刺激，以檢查其興奮性，鋅銅弓的原理？,實驗器械 (Tools),鋅銅弓用金屬鋅和銅鉚接而成，鋅銅弓在極性溶液中形成回路時，鋅與銅兩極產(chǎn)生約0.5~0.7V的直流電壓，因此可用來刺激神經(jīng)和肌肉，使神經(jīng)或肌肉興奮。這種刺激僅在鋅銅弓與神經(jīng)或肌肉接觸瞬間產(chǎn)生，持續(xù)接觸不能使神經(jīng)或肌肉興奮,為什么？,鋅銅弓原

10、理簡介：,金屬與溶液之間便產(chǎn)生了電位差——電極電位。如果將Zn和Cu一端接觸，則在接觸部位電流由Cu向Zn方向流動；而在溶液中則相反，由Zn向Cu流動。當鋅銅弓接觸組織時（注意：表面必須濕潤），電流便沿Zn→可興奮組織→Cu方向流動，而產(chǎn)生流動作用。這樣，鋅銅弓好像一個電池，Zn如同其陽極，Cu好像陰極而發(fā)揮作用。神經(jīng)或肌肉的電刺激閾值非常小，所以僅用鋅銅弓接觸，即可構(gòu)成刺激，以便檢驗組織的機能活性。,,Cu和Zn外部電子分布可以由上頁

11、第一段解釋，內(nèi)部怎么理解？,實驗方法 (Methods)視頻,搗毀蟾蜍腦、脊髓 小心毒液，雙毀髓時應(yīng)注意使蟾蜍頭部前俯，防止耳后腺分泌物射入實驗者眼內(nèi)，如被射入，應(yīng)立即用生理鹽水沖洗眼睛。剪除蟾蜍軀干上部、內(nèi)臟剝皮,,剝皮后蛙的后肢：,分離兩腿，制作坐骨神經(jīng)－腓腸肌標本,1、 分離兩腿 (separate the two legs) 2、 游離結(jié)扎腓腸肌 (dissociate & ligaturethe G

12、astrocnemius) 3、 游離坐骨神經(jīng) (dissociate the sciatic nerve) 4、 游離、剪斷股骨 (free & cut the thigh bone) 5、 剪斷膝關(guān)節(jié) (cut the knee joint),完成制作, 用鋅銅弓檢查標本興奮性 Check the excitability of the specimen,注意事項（Attention）,1、小心毒液，雙毀髓