蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析坐骨神經(jīng)夾傷后大鼠腓腸肌蛋白表達(dá)變化.pdf

1、目的:采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析坐骨神經(jīng)夾傷后大鼠腓腸肌的蛋白質(zhì)表達(dá)變化，為進(jìn)一步探討失神經(jīng)肌萎縮的分子機制及更好的防治骨骼肌失神經(jīng)萎縮提供理論基礎(chǔ)。 方法:建立大鼠坐骨神經(jīng)夾傷模型，提取大鼠腓腸肌總蛋白，進(jìn)行第一向等電聚焦(IEF)和第二向十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)技術(shù)分離總蛋白，Bio-SafeTMCommassie染色，GS-800密度掃描儀獲取圖像，并測量了凝膠蛋白斑點的在IEF和SDS-PAGE方

2、向上的位置偏差。利用PDQuest軟件對凝膠圖像進(jìn)行分析，以識別差異表達(dá)的蛋白質(zhì)；膠內(nèi)酶解差異表達(dá)蛋白，應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜得到相應(yīng)的肽質(zhì)量指紋圖譜，然后搜索數(shù)據(jù)庫鑒定差異蛋白質(zhì)點。 結(jié)果:通過軟件分析發(fā)現(xiàn)，不同凝膠間蛋白質(zhì)點在IEF方向的偏差為(0．49±0．44)mm，在SDS-PAGE方向上的偏差為(0．51±0．44)mm。坐骨神經(jīng)夾傷后不同時間腓腸肌組織中有61個蛋白質(zhì)的表達(dá)發(fā)生了明顯變化，其中有16個

3、點發(fā)生穩(wěn)定而顯著的變化，其中¨個蛋白在坐骨神經(jīng)夾傷后1w或2w內(nèi)表達(dá)逐漸下降，在隨后的觀察時間內(nèi)其表達(dá)又逐漸上升；5個蛋白在坐骨神經(jīng)夾傷后1w時表達(dá)上升，隨后表達(dá)又漸漸下降。通過質(zhì)譜分析并進(jìn)行網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫搜索匹配，發(fā)現(xiàn)這些蛋白主要包括收縮相關(guān)蛋白(原肌球蛋白β鏈、肌球蛋白重鏈(IIXIIB)等)、代謝相關(guān)蛋白(肌酸激酶、β烯醇(化)酶等)、分子伴侶(AlphaB一晶狀體蛋白)、骨架蛋白(核纖層蛋白)以及其它蛋白(信號肽肽酶樣蛋白．3等)。