植物生理學(xué)

1、生物化學(xué)課件(供臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)使用)2008，3,蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能,第 一 章,Structure and Function of Protein,一、什么是蛋白質(zhì)?,蛋白質(zhì)(protein)是由許多氨基酸(amino acids)通過肽鍵(peptide bond)相連形成的高分子含氮化合物。,概述,二、蛋白質(zhì)的生物學(xué)重要性,1. 蛋白質(zhì)是生物 體重要組成成分分布廣：所有器官、組織都含有蛋白質(zhì)；細(xì)胞的各個(gè)部分都含有蛋白質(zhì)。含量

2、高：蛋白質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)最豐富的有機(jī)分子，占人體干重的45％，某些組織含量更高，例如脾、肺及橫紋肌等高達(dá)80％。,1）作為生物催化劑（酶）2）代謝調(diào)節(jié)作用3）免疫保護(hù)作用4）物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和存儲(chǔ)5）運(yùn)動(dòng)與支持作用6）參與細(xì)胞間信息傳遞,2. 蛋白質(zhì)具有重要的生物學(xué)功能,3. 氧化供能,蛋 白 質(zhì) 的 分 子 組 成The Molecular Component of Protein,第 一 節(jié),一、 組成蛋白質(zhì)的元素,.主要有C、H、

3、O、N和S。 有些蛋白質(zhì)含有少量磷或金屬元素鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬，個(gè)別蛋白質(zhì)還含有碘 。,各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，平均為16％。,由于體內(nèi)的含氮物質(zhì)以蛋白質(zhì)為主，因此，只要測(cè)定生物樣品中的含氮量，就可以根據(jù)以下公式推算出蛋白質(zhì)的大致含量：,100克樣品中蛋白質(zhì)的含量 ( g % )= 每克樣品含氮克數(shù)× 6.25×100,1/16%,蛋白質(zhì)元素組成的特點(diǎn),二、蛋白質(zhì)的基本單位-氨基酸(一)

4、氨基酸的結(jié)構(gòu)(通式),存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸僅有20種(20-22)，且均屬 L-氨基酸（甘氨酸除外）如圖示。,C H,,,,COOH,,R,R:H 甘AA; R:CH3 丙AAR:CH-OH 蘇AA CH3,,,,,,H2N,非極性側(cè)鏈氨基酸非電離極性側(cè)鏈氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸,(二）氨基酸的分類,* 20種氨

5、基酸的英文名稱、縮寫符號(hào)及分類如下:,甘氨酸 glycine Gly G 5.97,丙氨酸 alanine Ala A 6.00,纈氨酸 valine Val V 5.96,亮氨酸 leucine Leu L 5.98,異亮氨酸 isoleuc

6、ine Ile I 6.02,苯丙氨酸 phenylalanine Phe F 5.48,脯氨酸 proline Pro P 6.30,,非極性側(cè)鏈氨基酸,,,,,目 錄,色氨酸 tryptophan Try W 5.89,絲氨酸 serine Ser S

7、 5.68,酪氨酸 tyrosine Try Y 5.66,半胱氨酸 cysteine Cys C 5.07,蛋氨酸 methionine Met M 5.74,天冬酰胺 asparagine Asn N 5.41,谷氨酰胺 glutamine Gln

8、Q 5.65,蘇氨酸 threonine Thr T 5.60,2. 非電離極性側(cè)鏈氨基酸,,,,,目 錄,天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97,谷氨酸 glutamic acid Glu E 3.22,賴氨酸 lysine Lys K 9.7

9、4,精氨酸 arginine Arg R 10.76,組氨酸 histidine His H 7.59,3. 酸性氨基酸,4. 堿性氨基酸,,,,,目 錄,幾種特殊氨基酸,脯氨酸（亞氨基酸）,? 半胱氨酸,胱氨酸,* 以肽鍵相連接,肽鍵(peptide bond)是由一個(gè)氨基酸的?-羧基上的羥基與另一個(gè)氨基酸的?-氨基上的氫原子脫水縮合而形成的化

10、學(xué)鍵,如圖示:,三. 氨基酸在蛋白質(zhì)中的連接方式,+,,,甘氨酰甘氨酸,肽鍵,H2N,,C,,,C,,OH,,R1,H N H,,,C,,COOH,,,R2,,,,,,C,,N,,,,,,,,O,H,O,,H,* 肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。,* 兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基酸縮合則形成三肽……,* 肽鏈中的氨基酸分子因?yàn)槊撍s合而基團(tuán)不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。,* 由十個(gè)以內(nèi)氨基酸相連而成的肽

11、稱為寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相連形成的肽稱多肽(polypeptide)。,N 末端：多肽鏈中有自由氨基的一端C 末端：多肽鏈中有自由羧基的一端,多肽鏈有兩端,* 多肽鏈(polypeptide chain)是指許多氨基酸之間以肽鍵連接而成的一種結(jié)構(gòu)。,N末端,C末端,牛核糖核酸酶,. 幾種生物活性肽,1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH),GSH過氧化物酶,GSH還原酶,NADPH+H+,NADP

12、+,體內(nèi)許多激素屬寡肽或多肽,神經(jīng)肽(neuropeptide),2. 多肽類激素及活性肽,抗利尿素與催產(chǎn)素(9肽)、胰高血糖素（29肽）、腦啡肽（5肽）、降鈣素（32肽）、 ACTH（39肽）、胰島素（51肽）肌肽（2肽）、P物質(zhì)（10肽、屬神經(jīng)肽類）、β內(nèi)啡肽（31肽）,蛋 白 質(zhì) 的 分 子 結(jié) 構(gòu)The Molecular Structure of Protein,第 二 節(jié),蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括

13、一級(jí)結(jié)構(gòu)(primary structure)二級(jí)結(jié)構(gòu)(secondary structure)三級(jí)結(jié)構(gòu)(tertiary structure)四級(jí)結(jié)構(gòu)(quaternary structure),.概念：蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)指多肽鏈中氨基酸的排列順序。,一、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),.主要的化學(xué)鍵(主鍵)肽鍵，有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。,方向: N C; 或 NH2末端 羧基末端,,,

14、.提示：一級(jí)結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。它由遺傳密碼決定,其上有酶切位點(diǎn),一級(jí)結(jié)構(gòu)可測(cè)定,并不同種屬間有同源性.,,,,,目 錄,二、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu),參與肽鍵的6個(gè)原子C?1、、C、O、N、H、C?2位于同一平面，，此同一平面上的6個(gè)原子構(gòu)成了所謂的肽單元 (peptide unit) 。,肽鍵平面—形成二級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ),,有關(guān)對(duì)肽鍵平面的描述？,2.二級(jí)結(jié)構(gòu)的概念與基本形式A.概念:一條多肽鏈中局部原子的空間排佈B

15、.二級(jí)結(jié)構(gòu)的基本形式,（1） ?-螺旋 ( ? -helix ) （2） ?-折疊 ( ?-pleated sheet )（3） ?-轉(zhuǎn)角 ( ?-turn )（4）不規(guī)則卷曲 ( random coil ),（1）、α螺旋特點(diǎn) ①、②、③、④（2）、β折疊特點(diǎn) ①、②、③（3）、 β轉(zhuǎn)角（4）、無規(guī)則卷曲,?-螺旋,,,,,目 錄,,,,,,,,,,,,,R,R,R,R,R,R,R,R,R,?-折疊,?-折

16、疊,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,N,C,,,,,,,,,,,,,,,,,,,N,C,,,,,,,,,,,,,,,,,,,N,C,,N,C,,,,,維系力:鏈內(nèi)或鏈間氫鍵,,,N,C,?-轉(zhuǎn)角,?-轉(zhuǎn)角,,,轉(zhuǎn)角,含4個(gè)AA,3個(gè)肽鍵平面?,β-轉(zhuǎn)角 ① 180°的轉(zhuǎn)角部位②由4個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成③由第一個(gè)殘基的羰基氧（O）與第四個(gè)殘基的氨基氫（H）可形成氫鍵④多含脯氨酸和甘氨酸,不規(guī)則卷曲,環(huán)或卷曲結(jié)構(gòu) ：

17、無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部分肽鏈結(jié)構(gòu)。 相對(duì)沒有規(guī)律性的排布，但是其同樣表現(xiàn)重要生物學(xué)功用。 C.二級(jí)結(jié)構(gòu)的維系力:氫鍵,,.模體,在許多蛋白質(zhì)分子中，可發(fā)現(xiàn)二個(gè)或三個(gè)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽段，在空間上相互接近，形成一個(gè)特殊的空間構(gòu)象，被稱為模體(motif)。,,鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體,鋅指結(jié)構(gòu),,N,C,,N,C,.氨基酸殘基的側(cè)鏈對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)形成的影響,蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)是以一級(jí)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的。一段肽鏈其氨基酸殘基的側(cè)鏈適

18、合形成?-螺旋或β-折疊，它就會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的二級(jí)結(jié)構(gòu)。,(二)、蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu),一條多肽鏈中全部氨基酸殘基(全部元素)的相對(duì)空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。包括主鏈，側(cè)鏈的全部?jī)?nèi)容,1. 概念,為非共價(jià)鍵，次級(jí)鍵,（鹽鍵）,,,,,,目 錄,肌紅蛋白 (Mb),,肌紅蛋白為單肽鏈蛋白質(zhì)，含153個(gè)氨基酸殘基，它含有8個(gè)α螺旋區(qū)，依次稱為A到H螺旋，并含有β轉(zhuǎn)角及環(huán)-卷曲等二級(jí)結(jié)構(gòu)。,2.維系力 亞基之間的結(jié)合力有疏水作用

19、， Van der Waals力以及氫鍵和離子鍵,還有二硫鍵。,（三）蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu),(或蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。),1.概念 有些蛋白質(zhì)分子含有二條或多條多肽鏈，每一條多肽鏈都有完整的三級(jí)結(jié)構(gòu)，稱為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu).而每條多肽鏈被稱為亞基 (subunit)。,.蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu),具有四級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì),review,,Summary,三、 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,(一)、蛋白

20、質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 (二)、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,.一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ),(一)、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,.一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,例：鐮刀形紅細(xì)胞貧血,這種由蛋白質(zhì)分子發(fā)生變異所導(dǎo)致的疾病，稱為“分子病”。,（谷AA）,（頡AA）,,,,,,,,,S S,,,,S S,,,,S S,,N,N,A鏈、21AA,B鏈、30AA,胰島 素 A5 A6

21、 A10 B30人 Thr Ser Ile Thr 豬 Thr Ser Ile Ala,.肌紅蛋白與血紅蛋白的結(jié)構(gòu),(二)、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,,,,,目 錄,Hb與Mb一樣能可逆地與O2結(jié)

22、合， Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分?jǐn)?shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。,.血紅蛋白的構(gòu)象變化與結(jié)合氧,肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線,* 協(xié)同效應(yīng)(cooperativity),一個(gè)寡聚體蛋白質(zhì)的一個(gè)亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個(gè)亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應(yīng)。 如果是促進(jìn)作用則稱為正協(xié)同效應(yīng) (positive cooperativity)如果是抑制作用則稱為

23、負(fù)協(xié)同效應(yīng) (negative cooperativity),,,血紅素與氧結(jié)合后，鐵原子半徑變小，就能進(jìn)入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動(dòng)。,變構(gòu)效應(yīng)(allosteric effect),蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化，稱為變構(gòu)效應(yīng)。,天然狀態(tài)，有催化活性,尿素、 β-巰基乙醇,,去除尿素、β-巰基乙醇,非折疊狀態(tài)，無活性,,.蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病,

24、蛋白質(zhì)構(gòu)象疾?。喝舻鞍踪|(zhì)的折疊發(fā)生錯(cuò)誤，盡管其一級(jí)結(jié)構(gòu)不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病發(fā)生。,蛋白質(zhì)構(gòu)象改變導(dǎo)致疾病的機(jī)理：有些蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。,這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。,瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的

25、一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變。正常的PrP富含α-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為β-折疊的PrPsc，從而致病。,第三節(jié),蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)The Physical and Chemical Characters of Protein,蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán)，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。,* 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)( isoelectric

26、point, pI) 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時(shí)，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢(shì)相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時(shí)溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。,一、蛋白質(zhì)兩性解離和等電點(diǎn),Pr,,,COOH,NH3+,,,OH-,H+,Pr,,,NH3+,COO_,,,OH-,Pr,H+,,NH2,,COO,-,正離子pH＜ pI,兩性離子pH﹦pI,負(fù)離子pH ＞ pI,蛋白質(zhì)等電點(diǎn),Protein

27、 pIPepsin <1.0Serum albumin 4.9Urease 5.0Hemoglobin 6.8Myoglobin 7.0Chymotrypsinogen

28、 9.5Lysozyme 11.0,二.蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì),蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一，分子量可自1萬至100萬之巨，其分子的直徑可達(dá)1～100nm，為膠粒范圍之內(nèi)。,* 蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素顆粒表面電荷水化膜,水化膜,溶液中蛋白質(zhì)的聚合沉淀,三.蛋白質(zhì)的變性、沉淀和凝固,* 蛋白質(zhì)的變性(denaturation)在某些物理和化學(xué)因素作用下，其特定的空間構(gòu)

29、象被破壞，也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無序的空間結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。,引起變性的因素:物理、化學(xué)與生物學(xué)因素如如加熱、乙醇等有機(jī)溶劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子及生物堿試劑等 。,變性蛋白質(zhì)的特點(diǎn):,粘度增加，溶解度降低，易沉淀,易被蛋白酶降解,喪失生物學(xué)活性.,應(yīng)用舉例臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來消毒及滅菌。此外, 防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。,若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素

30、后，蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為復(fù)性(renaturation) 。,天然狀態(tài)，有催化活性,尿素、 β-巰基乙醇,,去除尿素、β-巰基乙醇,非折疊狀態(tài)，無活性,,* 蛋白質(zhì)沉淀在一定條件下，蛋白疏水側(cè)鏈暴露在外，肽鏈融會(huì)相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。變性的蛋白質(zhì)易于沉淀，有時(shí)蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀，但并不變性。,* 蛋白質(zhì)的凝固作用(protein coagulation) 蛋白質(zhì)變性后的絮狀物加熱可變成比較

31、堅(jiān)固的凝塊，此凝塊不易再溶于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中。,四、蛋白質(zhì)的紫外吸收,由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波長(zhǎng)處有特征性吸收峰。蛋白質(zhì)的OD280與其濃度呈正比關(guān)系，因此可作蛋白質(zhì)定量測(cè)定。（與Trp Tyr有關(guān)）,五、 蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng),⒈茚三酮反應(yīng)(ninhydrin reaction) 蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應(yīng)。,⒉雙縮脲反應(yīng)(biuret reaction)蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵

32、在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來檢測(cè)蛋白質(zhì)水解程度。,A、蛋白質(zhì)的分離和純化,（一）透析及超濾法,* 透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。,* 超濾法 應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。,生物化學(xué)技術(shù)：,&.透析,（二）丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀,*使用丙酮沉淀時(shí)，必須在0～4℃低溫下進(jìn)行，丙

33、酮用量一般10倍于蛋白質(zhì)溶液體積。蛋白質(zhì)被丙酮沉淀后，應(yīng)立即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。,*鹽析(salt precipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。,* 免疫沉淀法：將某一純化蛋白質(zhì)免疫動(dòng)物可獲得抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗體識(shí)別相應(yīng)的抗原蛋白，并形成抗原抗體復(fù)合物的性質(zhì)，可從蛋白質(zhì)混合溶液中分離獲得抗原蛋白。,,,,,,,,,,,,,bi

34、nding,,,,,,,wash,elution,免疫沉淀,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,抗體,Protein A-agarose,（三）電泳,蛋白質(zhì)在高于或低于其pI的溶液中為帶電的顆粒，在電場(chǎng)中能向正極或負(fù)極移動(dòng)。這種通過蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中泳動(dòng)而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù), 稱為電泳(elctrophoresis) 。根據(jù)支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。,

35、幾種重要的蛋白質(zhì)電泳*SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定。*等電聚焦電泳，通過蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異而分離蛋白質(zhì)的電泳方法。*雙向凝膠電泳是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。,SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,（四）層析,層析(chromatography)分離蛋白質(zhì)的原理待分離蛋白質(zhì)溶液（流動(dòng)相）經(jīng)過一個(gè)固態(tài)物質(zhì)（固定相）時(shí)，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質(zhì)組分在兩相中反復(fù)分配，并以不

36、同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的 。,蛋白質(zhì)分離常用的層析方法* 離子交換層析：利用各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同進(jìn)行分離。* 凝膠過濾(gel filtration)又稱分子篩層析，利用各蛋白質(zhì)分子大小不同分離。,,,,,目 錄,,,,,目 錄,（五）超速離心,* 超速離心法(ultracentrifugation)既可以用來分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量。,*蛋白質(zhì)在離心場(chǎng)中的行為用沉降系數(shù)(sedimenta

37、tion coefficient, S)表示,沉降系數(shù)與蛋白質(zhì)的密度和形狀相關(guān) 。,因?yàn)槌两迪禂?shù)S大體上和分子量成正比關(guān)系，故可應(yīng)用超速離心法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量，但對(duì)分子形狀的高度不對(duì)稱的大多數(shù)纖維狀蛋白質(zhì)不適用。,B、多肽鏈中氨基酸序列分析,分析已純化蛋白質(zhì)的氨基酸殘基組成,測(cè)定多肽鏈的氨基末端與羧基末端為何種氨基酸殘基,把肽鏈水解成片段，分別進(jìn)行分析,測(cè)定各肽段的氨基酸排列順序，一般采用Edman降解法,一般需用數(shù)種水解法，并分析出各

38、肽段中的氨基酸順序，然后經(jīng)過組合排列對(duì)比，最終得出完整肽鏈中氨基酸順序的結(jié)果。,,,,,通過核酸來推演蛋白質(zhì)中的氨基酸序列,按照三聯(lián)密碼的原則推演出氨基酸的序列,分離編碼蛋白質(zhì)的基因,測(cè)定DNA序列,排列出mRNA序列,,,,C、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)測(cè)定,* 二級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定通常采用圓二色光譜(circular dichroism，CD)測(cè)定溶液狀態(tài)下的蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)含量。 ?-螺旋的CD峰有222nm處的負(fù)峰、208nm處的負(fù)峰和198 n

39、m處的正峰三個(gè)成分；而?-折疊的CD譜不很固定。,* 三級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定X射線衍射法(X-ray diffraction)和核磁共振技術(shù)(nuclear magnetic resonance, NMR)是研究蛋白質(zhì)三維空間結(jié)構(gòu)最準(zhǔn)確的方法。,* 用分子力學(xué)、分子動(dòng)力學(xué)的方法，根據(jù)物理化學(xué)的基本原理，從理論上計(jì)算蛋白質(zhì)分子的空間結(jié)構(gòu)。,根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸序列預(yù)測(cè)其三維空間結(jié)構(gòu),* 通過對(duì)已知空間結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析，找出一級(jí)結(jié)構(gòu)與空間結(jié)構(gòu)的